組蛋白去乙?;敢种苿㏒AHA對(duì)人臟靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的抑制及其初步機(jī)制.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  通過研究組蛋白去乙?;敢种苿㏒AHA對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)生物學(xué)特性的影響;探究其對(duì)血管生成的作用。并進(jìn)一步探討組蛋白去乙?;敢种苿㏒AHA對(duì)血管生成影響的相關(guān)機(jī)制。
  方法:
  1.CCK-8法檢測(cè)SAHA對(duì)HUVEC增殖能力的影響。
  2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)15μM SAHA處理HUVEC48h后細(xì)胞周期的

2、分布;Annexin-V/PI雙染色法觀察SAHA對(duì)HUVEC的凋亡情況的影響。
  3.Transwell小室法觀察15μM SAHA處理HUVEC48h后其遷移能力的變化。
  4.基質(zhì)膠體外成管實(shí)驗(yàn)觀察15μM SAHA處理HUVEC48h后其在基質(zhì)膠上形成管腔樣結(jié)構(gòu)的能力。
  5.Western-blot法檢測(cè)15μM SAHA處理48h后HUVEC細(xì)胞中caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)相關(guān)蛋白、VEGF信號(hào)通路相關(guān)蛋

3、白及P53、P21等蛋白表達(dá)的變化。
  6.基質(zhì)膠體內(nèi)血管生成實(shí)驗(yàn)觀察小鼠體內(nèi)基質(zhì)膠栓中新生血管的數(shù)量從而檢測(cè)SAHA對(duì)小鼠體內(nèi)血管形成的影響。
  結(jié)果:
  1.CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示:SAHA能夠抑制HUVEC的增殖,抑制作用隨著劑量的增大、時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。
  2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:15μM SAHA處理HUVEC48h后處于S期的細(xì)胞比例增加;Annexin-V/PI雙染法結(jié)果顯示SAHA處理后H

4、UVEC細(xì)胞凋亡率明顯增高。
  3.Transwell小室法結(jié)果顯示,15μM SAHA處理HUVEC48h后,與對(duì)照組相比較,SAHA處理組遷移過膜的HUVEC細(xì)胞數(shù)明顯降低。
  4.基質(zhì)膠體外成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,15μM SAHA處理HUVEC48小時(shí)后,HUVEC形成的管腔樣結(jié)構(gòu)明顯少于對(duì)照組。
  5.15μM SAHA處理HUVEC48h后,Western-blot結(jié)果顯示,SAHA使HUVEC細(xì)胞中cas

5、pase級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的活性蛋白增加,抑制VEGF相關(guān)信號(hào)通路,同時(shí)SAHA還使HUVEC細(xì)胞中P53和P21表達(dá)升高。
  6.基質(zhì)膠體內(nèi)成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SAHA處理組小鼠體內(nèi)的基質(zhì)膠栓中新生的血管數(shù)明顯少于對(duì)照組。
  結(jié)論:
  組蛋白去乙?;敢种苿㏒AHA能夠使HUVEC的細(xì)胞周期阻滯在S期并促進(jìn)HUVEC凋亡的發(fā)生從而抑制HUVEC的增殖;同時(shí)抑制HUVEC遷移及體內(nèi)外血管腔樣結(jié)構(gòu)的形成;SAHA對(duì)HUVEC

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