組蛋白去乙?；敢种苿?duì)燙傷休克大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞活化和通透性的影響.pdf

1、目的：1.觀察組蛋白去乙?；敢种苿℉DACI）對(duì)大鼠50％TBSA Ⅲ°燙傷休克模型肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PMEC）活化和通透性的影響；2.研究HDACI對(duì)體外TNF-α刺激PMEC活化和通透性的影響及其機(jī)制，為其用于致死性燙傷休克的早期救治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：1.動(dòng)物模型雄性SD大鼠，麻醉后隨機(jī)分為①假燙組，水浴溫度37℃15s；②燙傷組，水溫80℃，背部和雙下肢15 s、腹部8 s，造成50％TBSAⅢ°燙傷；③HD

2、ACI組，分別于燙傷后即刻皮下注射兩種HDACI，丙戊酸鈉（VPA）和2-甲基-2-戊烯酸（2M2P）（300mg/kg體重，100mg/ml）.各組大鼠分別于燙傷后2h、6h及12h，采用伊文斯藍(lán)（EB）染色法檢測(cè)肺血管通透性；腹主動(dòng)脈取血檢測(cè)HCT和臟器功能指標(biāo)；取肺組織，干濕重法檢測(cè)肺組織含水率，免疫組化法檢測(cè)VEGF、E-selectin和ICAM-1表達(dá)；TUNEL法檢測(cè)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率。2.細(xì)胞培養(yǎng)雄性SD大鼠采用組織塊

3、法獲得肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PMECs）。在24孔Transwell小室中建立單層PMEC細(xì)胞進(jìn)行通透性試驗(yàn)，分為①對(duì)照組、②TNF-α組、③VPA組和④2M2P組。②③④組細(xì)胞加入TNF-α刺激（終濃度500ng/ml），⑦④組再分別加入VPA和2M2P（0.05mg/ml）。置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱6h后，在頂層小室中加入牛血清白蛋白（0.5mg/ml）。45min后在頂層小室和孔內(nèi)各取樣100μl，BCA法檢測(cè)蛋白濃度，計(jì)算通透系

4、數(shù)。另在24孔板中每孔加入106細(xì)胞，分組及處理同上。孵育6h后取上清液，采用ELISA法檢測(cè)VEGF、sICAM-1、sE-selectin、和HSP70，裂解細(xì)胞提取核蛋白檢測(cè)NF-κB濃度，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果： 1.建立了50％TBSAⅢ°燙傷休克大鼠模型 通過貼紙法確定50％TBSA燙傷面積，取燙傷部位組織病理檢查確認(rèn)達(dá)到Ⅲ°燙傷，燙傷組6h和12h死亡率分別為80％和100％。動(dòng)物的臨床表現(xiàn)、平均動(dòng)

5、脈壓和臟器功能顯示大鼠發(fā)生致死性燙傷休克。2.HDACI對(duì)燙傷休克大鼠模型肺血管通透性的影響與燙傷組相比，傷后2h和6h VPA組和2M2P組HCT和肺組織含水率降低，肺血管對(duì)EB的通透性降低（p均<0.05），肺水腫等病理改變減輕；VPA組作用顯著強(qiáng)于2M2P組（p<0.05）。3.HDACI對(duì)燙傷大鼠模型內(nèi)皮細(xì)胞活化和凋亡的影響燙傷后2h和6h，燙傷組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF、E-selectin、IChM-1表達(dá)及凋亡率均較假燙組

6、顯著升高；VPA組2h和6h各細(xì)胞因子陽性表達(dá)率和凋亡率均顯著低于燙傷組（p均<0.05）；2M2P組2h和6h各細(xì)胞因子陽性表達(dá)率與燙傷組無顯著差異（p均>0.05），凋亡率顯著低于燙傷組（p<0.05）。4.成功通過組織塊法獲得了穩(wěn)定的大鼠PMEC，并對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和熒光免疫學(xué)鑒定。5.HDACI對(duì)TNF-αz刺激PMEC單層細(xì)胞通透性的影響TNF-α刺激6h后，PMEC對(duì)牛血清白蛋白的通透系數(shù)Pa[×10-5ml/（min*cm

7、2）]較對(duì)照組顯著升高（435.10±36.87 Vs.72.54±11.38，p<0.05）。VPA組和2M2P組Pa顯著低于TNF-α組，VPA的作用明顯強(qiáng)于2M2P（276.55±30.18Vs.324.68±26.48，p<0.05）。6.HDACI對(duì)TNF-α刺激PMEC釋放細(xì)胞因子的影響TNF-α刺激后，VEGF、sE-selectin和sOCAbt-1表達(dá)均較對(duì)照組顯著增加，VPA組上述因子水平顯著低于TNF-α組（p均<

8、0.05）；2M2P組與TNF-α組無顯著差異（p<0.05）。7.HDACI對(duì)TNF-α刺激PMEC后NF-κB p65表達(dá)的影響VPA能顯著抑制TNF-α刺激引起的細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)增加（872.31.55±133.48 Vs.1637.84.68±215.64 pg/ml，p<0.05），而2M2P此作用不明顯。8.HDACI對(duì)TNF-α刺激PMEC后HSP70和凋亡率的影響與對(duì)照組相比，TNF-α刺激后PMEC表達(dá)H

9、SP70增加（97.54±7.64Vs.25.14±4.38，p<0.05），凋亡率升高（21.24±3.10％Vs.2.31±0.42％，p<0.05）；VPA和2M2P能促進(jìn)HSP70表達(dá)（177.88±19.85和126.35±14.89pg/ml），降低PMEC凋亡率（12.26±1.9％和16.42±2.6％），VPA作用明顯強(qiáng)于2M2P（p<0.05）。
　　 結(jié)論：大鼠50％TBSAⅢ°燙傷休克模型和體外PMEC細(xì)