鞭毛蛋白的表達(dá)純化和對(duì)免疫細(xì)胞的影響.pdf

1、背景：
　　鞭毛蛋白（flagellin）是組成細(xì)菌運(yùn)動(dòng)器官鞭毛的基本蛋白結(jié)構(gòu)。由于細(xì)菌種屬的不同，鞭毛蛋白的結(jié)構(gòu)也不同，但是其都擁有相似的結(jié)構(gòu)域，其D1結(jié)構(gòu)域相對(duì)保守，可以被TLR5所識(shí)別。鞭毛蛋白在參與細(xì)菌的致病機(jī)理和機(jī)體對(duì)其免疫應(yīng)答中都有重要作用。
　　自然殺傷（NK）細(xì)胞是一種固有免疫細(xì)胞，除了經(jīng)典的免疫監(jiān)視，免疫防御作用外，它也能分泌多種的細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。研究NK細(xì)胞的活性變化，一個(gè)重要的指標(biāo)就是NK細(xì)胞的

2、細(xì)胞毒性作用，NK92細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)以及小鼠NK細(xì)胞對(duì)Yac-1細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)NK細(xì)胞胞毒作用的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。
　　嗜堿粒細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)數(shù)量最少的白細(xì)胞，但是最近的研究表明，嗜堿粒細(xì)胞并非可有可無的細(xì)胞，該細(xì)胞在過敏疾病中的作用越來越受到研究者的注意。有證據(jù)顯示，在初始T細(xì)胞（naive T cell）向Th2細(xì)胞的分化過程中，嗜堿粒細(xì)胞可以提供一部分的關(guān)鍵細(xì)胞因子—IL-4，而IL-4的分泌變化也是考量嗜堿粒細(xì)胞細(xì)

3、胞活性的標(biāo)志之一。
　　目的：
　?。?）轉(zhuǎn)化Flic-PET30a至BL21細(xì)菌,刺激BL21表達(dá)來自于傷寒沙門氏菌的鞭毛蛋白并純化獲取該蛋白。
　　（2）研究該鞭毛蛋白對(duì)BMDC，BMMφ，NK細(xì)胞和BM-basophils的功能影響。
　　方法：
　?。?）采用分子克隆經(jīng)典方法轉(zhuǎn)化Flic-PET30a質(zhì)粒到BL21細(xì)菌，擴(kuò)增并用IPTG誘導(dǎo)其表達(dá)Flic蛋白。
　?。?）依據(jù)“蛋白HIS標(biāo)簽”

4、與鎳柱有高親和力，并且可以被特定咪唑濃度緩沖液洗脫的特點(diǎn)純化獲得較高純度的Flic蛋白。
　?。?）用Flic蛋白刺激小鼠BMDC和BMMφ來測(cè)定其分泌TNF-α分泌水平是否增加。
　?。?）用Flic蛋白刺激NK92，小鼠脾來源NK細(xì)胞，檢測(cè)其是否對(duì)NK細(xì)胞胞毒作用有影響。
　?。?）用Flic蛋白刺激小鼠BM-basophils，檢測(cè)其IL-4分泌水平是否增加。
　　結(jié)果：
　?。?）表達(dá)并純化獲取了來