鞭毛蛋白分離純化及其在膿毒癥肺損傷中作用的初步探討.pdf

1、本實驗通過酸裂解的方法從甲型副傷寒沙門氏菌分離出粗制鞭毛蛋白，并經(jīng)除鹽、弱陰離子交換，獲得純化的鞭毛蛋白。用其免疫大鼠，約7-8周后獲得高效價的抗血清。然后通過盲腸結扎穿孔(cecalligationandpuncture,CLP)的方法復制大鼠膿毒癥急性肺損傷(acutelunginjure，ALI)模型，觀察ALI發(fā)病過程中①血清和支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid，BALF)中鞭毛蛋白含量的變化

2、；②動脈血氧分壓(partialpressureofoxygeninartery,PaO2)的變化；③肺濕干比值(wet/dryratio，W/D)的變化；④鞭毛蛋白含量與PaO2和W/D比值的相關性；⑤血清和BALF中腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)含量的變化。并采用膿毒癥ALI模型，觀察早期應用自制的鞭毛蛋白抗血清后①PaO2和W

3、/D比值的變化；②血清和BALF中TNF-α和IL-1β含量的變化。 結果顯示：(1)純化的鞭毛蛋白經(jīng)SDS檢測，分子量約為52kD。(2)純化的鞭毛蛋白經(jīng)WesternBlot檢測，在52kD處見到清楚的蛋白條帶，磷鎢酸負染掃描電鏡觀察到蛋白呈細絲狀。(3)雙向免疫擴散法檢測到鞭毛蛋白抗血清效價為1：64，該血清經(jīng)WesternBlot檢測，有蛋白條帶位于52kD處。(4)采用盲腸結扎穿孔的方法，可成功地復制大鼠膿毒癥肺損傷模

4、型(致傷組)。在致傷過程中，①血清和BALF中鞭毛蛋白含量逐漸升高，6h后血清中鞭毛蛋白含量顯著高于對照組(P＜0.01)，12h后BALF中鞭毛蛋白含量顯著高于對照組(P＜0.01)；②PaO2逐漸下降，12h后顯著低于對照組(P＜0.01)；③W/D比值逐漸升高，12h后顯著高于對照組(P＜0.01)；④血清和BALF中鞭毛蛋白含量變化與PaO2變化呈負相關(相關系數(shù)r分別為-0.939、-0.931，P＜0.01)，血清和BALF

5、中鞭毛蛋白含量與肺W/D比值變化呈正相關(相關系數(shù)r分別為0.935、0.920，P＜0.01)；⑤血清和BALF中TNF-α和IL-1β含量逐漸升高，6h后TNF-α含量顯著高于對照組(P＜0.01)，12h后IL-1β含量顯著高于對照組(P＜0.01)；⑥組織病理學改變：大體觀察，致傷組12h后可見肺臟腫脹，表面有廣泛大小不等的暗紅色斑片狀病灶，切面可見淡紅色或白色泡沫狀液體溢出；光鏡觀察，12h后可見灶性肺間質和肺泡水腫，及明顯的

6、肺出血等，表現(xiàn)為以多形核白細胞(polymorphonuclearleukocyte，PMN)滲出為主的炎癥反應，隨時間進行性加重。(5)在復制膿毒癥肺損傷模型過程中，早期應用鞭毛蛋白抗血清(抗血清組)，發(fā)現(xiàn)抗血清可推遲ALI發(fā)生，表現(xiàn)為①在12h后，PaO2才顯著低于對照組(P＜0.01)，W/D比值顯著高于對照組(P＜0.01)，且在12h和24h時，PaO2顯著高于對應時相點致傷組(P＜0.01)，W/D比值顯著低于對應時相點致傷

7、組(P＜0.01)；②在12h后，血清和BALF中TNF-α含量顯著高于對照組(P＜0.01)，且在6h、12h和24h時，其含量顯著低于對應時相點致傷組(P＜0.01)；③在24h后，血清和BALF中IL-1β含量顯著高于對照組(P＜0.01)，且在12h和24h時，其含量顯著低于對應時相點致傷組(P＜0.01)；④到24h后，才觀察到肺組織出現(xiàn)灶性肺間質和肺泡水腫，及明顯的肺出血等，表現(xiàn)為以PMN滲出為主的炎癥反應。 以上結