兩種皮質(zhì)發(fā)育障礙大鼠模型形態(tài)學(xué)研究和相關(guān)基因篩選.pdf

1、目的：構(gòu)建兩種皮質(zhì)發(fā)育障礙(disordersofcorticaldevelopment，DCDs)動(dòng)物模型，研究模型的形態(tài)學(xué)特征以及共同的差異基因，為進(jìn)一步研究DCDs的形成機(jī)制提供基因水平研究平臺(tái)。 方法：用兩種方法制備DCDs模型：①射線損傷模型(射線組)：采用劑量為1．45Gy的Y一射線照射妊娠15天Sprague-Dawley(SD)大鼠制作子代大鼠DCDs模型；②卡莫司汀(carmustine，1-3-bis—chl

2、oroethyl-nitrosourea，BCNU)藥物損傷模型(藥物組)：取妊娠15天的SD大鼠，腹腔注入卡莫司汀，制作子代大鼠DCDs模型。同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組。 對(duì)兩種DCDs模型的形態(tài)學(xué)比較研究包括：①兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組子代大鼠出生第30天(P30)斷頭處死取腦，常規(guī)病理學(xué)檢查，觀察腦皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)，比較兩種模型在病理表現(xiàn)上的異同。②免疫組化方法觀察Cajal-Retzius(CR)細(xì)胞在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組子代大鼠大腦皮質(zhì)中的陽性表達(dá)。以上

3、兩項(xiàng)均與正常對(duì)照組比較。 取兩種DCDs模型的子代新生鼠(P0)全腦做基因芯片掃描，結(jié)果與正常對(duì)照組比較，獲得兩種模型共有的差異基因。各組子代鼠PO取腦組織，分別提取總RNA，純化合成雙鏈eDNA；采用體外轉(zhuǎn)錄方法獲得大量cRNA與Affymetrix的大鼠表達(dá)譜芯片2302．0進(jìn)行雜交。Affymetrix掃描儀掃描芯片結(jié)果，GCOSl．4軟件讀取、處理數(shù)據(jù)。差異基因篩選標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組信號(hào)比值的絕對(duì)值≥2，即Signal

4、logratio絕對(duì)值≥0．58，正值為上調(diào)基因；負(fù)值為下調(diào)基因。得到兩個(gè)模型共有的差異基因，做為DCDs模型相關(guān)的候選基因。 結(jié)果：①兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組子代大鼠腦外觀均比對(duì)照組偏小；藥物組鼠腦大小與藥物劑量呈反比。常規(guī)病理檢查可見射線組和藥物組較大劑量(16mg／kg給藥)大鼠出現(xiàn)廣泛的皮質(zhì)發(fā)育不良，大腦皮質(zhì)變薄，層狀結(jié)構(gòu)紊亂。海馬線型結(jié)構(gòu)中斷，CAl區(qū)見神經(jīng)元結(jié)節(jié)狀聚集。類似人類神經(jīng)元結(jié)節(jié)性移位。藥物組較小劑量時(shí)海馬形態(tài)學(xué)改變與射線

5、組一致性不夠好。②免疫組化方法研究P30模型鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)CR細(xì)胞大量存在；對(duì)照組P30大鼠大腦內(nèi)未見到CR細(xì)胞。③模型鼠與對(duì)照組比較，共有54個(gè)差異表達(dá)基因。其中3個(gè)基因達(dá)上調(diào)，包括MT-protocadherin基因等；51個(gè)基因表達(dá)下調(diào)，包括somatostatinreceptorl(Sstrl)和Transforminggrowthfactor，beta2(TGFβ2)等。這些差異基因功能大多和細(xì)胞分裂周期調(diào)控、細(xì)胞遷移、細(xì)胞間的