小鼠腎小體發(fā)生與發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的：通過觀察小鼠腎小體的發(fā)生與發(fā)育、腎小體數(shù)目的改變、腎小體各組成細胞的超微結(jié)構(gòu)變化、細胞增殖與凋亡及凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax的表達，研究小鼠腎小體發(fā)生和發(fā)育過程中腎小體體積增長曲線、各種細胞的形態(tài)學(xué)改變以及細胞增殖與凋亡的變化規(guī)律，探討增殖與凋亡兩者之間的關(guān)系及其在小鼠腎小體正常發(fā)育過程中的作用。 材料和方法：中國昆明小白鼠(錦州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)，雌、雄3：1同窩飼養(yǎng)，以觀察到雌鼠陰道栓脫落的最早時間計為胚齡0

2、天(E0d)。孕鼠分籠飼養(yǎng)2周后，每日早8時、晚5時觀察生產(chǎn)情況，以觀察到仔鼠出生的最早時間計為生后0天(N0d)。選取胚齡10天、12天、14天、16天、18天的胎鼠和生后1天、3天、7天、10天、14天、21天、40天的仔鼠腎臟，采用Fractionator方法，以0.825mm間距排刀橫向截切全腎呈薄片狀，10％甲醛溶液固定48小時后，微量排水法測腎臟體積。應(yīng)用光鏡技術(shù)結(jié)合體視學(xué)分析方法對不同胚齡和生后日齡的發(fā)育不同階段的小鼠腎小

3、體進行系統(tǒng)觀察和體視學(xué)測量；應(yīng)用組織培養(yǎng)、后腎移植和光鏡、電鏡技術(shù)對發(fā)育不同階段的腎小體各組成成分的形態(tài)學(xué)變化進行系統(tǒng)觀察；應(yīng)用PCNA免疫組織化學(xué)方法、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記法(TUNEL染色法)結(jié)合光鏡電鏡技術(shù)，對發(fā)育不同階段腎小體的細胞增殖和凋亡及Bcl-2和Bax基因的表達進行觀察和分析。 結(jié)果：小鼠腎小體發(fā)育過程分為四個階段(五期)，即逗號小體階段(Ⅰ期)、S小體階段(Ⅱ期)、毛細血管袢階段(Ⅲ期)、較成熟

4、的腎小體階段(Ⅳ期和Ⅴ期)。胚齡14天生腎區(qū)出現(xiàn)，即在輸尿管芽分支周圍出現(xiàn)了小泡體、逗號小體、S小體。生后7天生腎區(qū)消失。胚齡16天，Ⅲ、Ⅳ期腎小體出現(xiàn)，其體積從胚齡16天到生后40天大約增大70倍。腎小體數(shù)目從胚齡16天到生后7天逐漸增多，其增長速度以生后3天到生后7天為最大，生后7天以后腎小體數(shù)目不再增加，基本保持恒定。 胚齡13天后腎尚未出現(xiàn)腎小體時經(jīng)組織培養(yǎng)5天，或移植到受鼠5天后出現(xiàn)了成熟的腎小體的結(jié)構(gòu)；連續(xù)切片觀察未

5、發(fā)現(xiàn)來自受體血管侵入埋植的后腎組織中。電鏡下觀察表明：上皮基膜先于內(nèi)皮基膜出現(xiàn)，最后兩層膜融合為一層。早期(Ⅰ、Ⅱ期)內(nèi)皮細胞無核部分是連續(xù)的，無小孔結(jié)構(gòu)。在發(fā)育過程中小孔結(jié)構(gòu)逐漸增多。早期足細胞的形狀為高立方形，基部伸出小突起并穿過基膜與內(nèi)皮細胞緊貼。隨著腎小體的發(fā)育(Ⅲ期)，足細胞形狀較前低平，呈立方狀，早期足突開始形成。少量原始寬大的足突屬于初級足突，隨后分化成窄小的次級足突，并且相互形成了指狀交叉，出現(xiàn)大量發(fā)育成熟的足突和由單層

6、膜覆蓋的裂孔。在早期血管球發(fā)育過程中，足細胞可出現(xiàn)兩種類型，即明型和暗型。 PCNA免疫細胞化學(xué)顯示：逗號小體、S小體期所有細胞顯示PCNA強陽性反應(yīng)，Ⅲ、Ⅳ期腎小體陽性細胞逐漸減少，Ⅴ期腎小體PCNA陽性細胞少見。TUNEL陽性細胞多出現(xiàn)在生前，主要在Ⅲ、Ⅳ期腎小體表達，而此時bcl-2/bax比值明顯降低。電子顯微鏡技術(shù)揭示：早期腎小體所有細胞核分裂相機率均高，Ⅲ期腎小體中的內(nèi)皮細胞、足細胞核分裂相機率高，Ⅳ期腎小體中只見到

7、內(nèi)皮細胞核分裂相，Ⅴ期腎小體中所有細胞核分裂相少見。電鏡下所見的細胞凋亡多在Ⅲ、Ⅳ期腎小體，其中以內(nèi)皮細胞、腎小囊壁層細胞凋亡居多。 結(jié)論：小鼠腎小體于胚齡14天發(fā)生，生后7天數(shù)目恒定，生后40天達到成年水平。 血管球來源于內(nèi)源性后腎細胞；發(fā)育過程中上皮和內(nèi)皮形狀逐漸低平，內(nèi)皮孔逐漸增多。隨著足細胞底部突起的出現(xiàn)和相互間的指狀交叉，足細胞分化出足突和裂孔膜。上皮基膜先于內(nèi)皮基膜出現(xiàn)，然后兩層膜融合為一層永久性基膜。在血管球