一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定、毒力及病毒蛋白的研究.pdf

1、本文對來自臨床的疑似豬繁殖與呼吸綜合征的豬肺臟病料進行病毒分離，在Marc-145細胞上分離得到一株病毒，定名為PP03。經(jīng)傳代后，細胞病變出現(xiàn)穩(wěn)定，以細胞圓縮、聚集、脫落為特征。該病毒接種Vero、PK15細胞并盲傳三代均不出現(xiàn)細胞病變。 通過電鏡觀察可以看出該病毒粒子呈球形，有囊膜，大小為65-70nm左右，在細胞中分布于細胞漿。通過免疫電鏡可以看到病毒與抗體形成的抗原抗體復(fù)合物。在理化試驗中，該病毒56℃30 min被滅活

2、，對酸度變化較為敏感，在PH6.5-7.2環(huán)境中病毒毒力穩(wěn)定。該病毒TCID<,50>為10<'-3.62>/ml，在傳代細胞上毒力中等，通過血清中和試驗最終證明PP03是一株P(guān)RRSV病毒。 在動物試驗中，PP03很好的復(fù)制出了豬繁殖與呼吸綜合征臨床癥狀。PP03試驗豬表現(xiàn)出典型的呼吸癥狀，剖解可以看出其肺臟出現(xiàn)典型的間質(zhì)性肺炎病變。采集發(fā)病豬血清作ELISA抗體檢測，可以觀察到抗體效價在接種后的變化規(guī)律，接種后10～20 d

3、抗體水平出現(xiàn)急劇升高和降低，30 d后趨于平穩(wěn)并在其后一段時間內(nèi)維持在一個較高的水平。從發(fā)病豬肺臟再次成功分離得到一致的病毒。參考毒株ZM接種豬未表現(xiàn)任何明顯臨床癥狀，剖解后肺臟亦無明顯病理變化。通過ELISA抗體檢測發(fā)現(xiàn)，在接種ZM后10～24 d抗體呈現(xiàn)溫和的上升趨勢，接種后28 d達到較高水平后趨于平穩(wěn)。在對ZM接種豬的肺臟進行病毒分離后亦得到相同的病毒。 通過SDS-PAGE蛋白電泳，分析了PP03的病毒蛋白，并與參考毒