豬繁殖與呼吸綜合征病毒的RNA多態(tài)性研究.pdf

1、2006我國(guó)南方地區(qū)發(fā)生了以高熱、高發(fā)病率、高死亡率為特征的傳染病。而后蔓延到全國(guó)大部分養(yǎng)豬地區(qū),給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病于2006年7月傳入福建省,之后在我省迅速蔓延傳播。本試驗(yàn)的目的是利用mRNA差異顯示技術(shù),建立PRRSV多態(tài)性研究的方法,并通過此技術(shù)獲得病毒變異相關(guān)基因片段。
　　 本研究采用mRNA差異顯示技術(shù),以實(shí)驗(yàn)室分離保存的普通型PRRSV-FJ02A株、變異型PRRSV-FJ06A株、變異型PRR

2、SV-FJ07A株、變異型PRRSV-FJ08A株等4株病毒為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行四株病毒的基因差異表達(dá)分析。采用3條錨定引物和20條隨機(jī)引物進(jìn)行mRNA差異顯示試驗(yàn),試驗(yàn)經(jīng)過引物篩選、變性聚丙烯酰氨凝膠電泳、銀染等過程最后篩選獲得10條差異表達(dá)片段。將其中兩條片段進(jìn)行回收,將這兩條片段分別連接到T載體上,然后轉(zhuǎn)化到DH5a上,接著挑菌、提取質(zhì)粒,通過酶切鑒定,篩選出陽(yáng)性克隆,最后進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表明:在這兩個(gè)片段的兩端均分別有mRNA差異

3、顯示技術(shù)所用引物的結(jié)合位點(diǎn),片段大小也與PCR擴(kuò)增出來的條帶大小相一致,片段長(zhǎng)度分別為209bp和272bp進(jìn)一步證實(shí)了目的片段的正確性。使用NCBI的blast程序和DNASTAR軟件;對(duì)這兩個(gè)片段的進(jìn)行序列分析,結(jié)果表明引物組合錨定1-S2差異片段與數(shù)據(jù)庫(kù)中其他PRRSV全基因序列相似性較低。兩個(gè)差異片段與VR2332株比較核苷酸同源性分別78.9％和68.6％。并且這兩個(gè)片段分別在不同部位出現(xiàn)不同程度的堿基突變或缺失,因此初步推測(cè)