兩種虹彩病毒ISKNV和TFV的細胞感染研究.pdf

1、傳染性脾腎壞死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)是重要養(yǎng)殖魚類鱖魚(Siniperca chuami)暴發(fā)性流行病的病原，為虹彩病毒科(Iridoviridae)，細胞腫大病毒屬(Megalocytivirus)的代表種?；⒓y蛙病毒(tigerfrog virus，TFV)是使養(yǎng)殖虎紋蛙蝌蚪(Rana tigrina rugulosa)和中華鱉(Trionyxsin

2、ensis)發(fā)病致死的主要病原，屬于虹彩病毒科，蛙病毒屬(Ranavirus)。 本研究用ISKNV對本實驗室現(xiàn)有魚類細胞系進行了敏感細胞系篩查，結果沒有找到可感染ISKNV的細胞系?；诖耍_展了鱖魚多種組織及仔魚的原代細胞培養(yǎng)工作。其中鱖魚心臟和腦的原代細胞在傳代至9代左右時無法繼續(xù)維持；鰭條細胞(MF)可傳代至13代，無法繼續(xù)培養(yǎng)；腎細胞(MK)生長情況良好，可傳代培養(yǎng)至13代左右；鱖魚仔魚細胞(M-Fry)在傳至30余代

3、后仍保持良好狀態(tài)，存活一年多，營養(yǎng)條件及培養(yǎng)環(huán)境基本穩(wěn)定，有望建立成熟細胞系。通過ISKNV攻毒實驗，發(fā)現(xiàn)M-Fry、MK和MF在感染ISKNV后均可以出現(xiàn)細胞病理變化(cytopathognic effect，CPE)，但并非典型的病毒空斑現(xiàn)象。逆轉錄PCR結果證實該病毒確實在這三種細胞中發(fā)生轉錄。通過電子顯微鏡觀察只在M-Fry細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有二十面體結構的ISKNV病毒粒子。利用對ISKNV敏感的M-Fry細胞，進行病毒部分基因的轉錄

4、分析，獲得ISKNV部分基因表達時相的同時，也證實M-Fry細胞可作為ISKNV全基因組轉錄時相分析的有力工具，為ISKNV全部ORF的劃分、聚類提供更多實驗依據(jù)。 TFV病毒已知其有多種魚類敏感細胞系。由于斑馬魚胚胎細胞系ZF4的建立使其成為體外及細胞水平研究的有力工具，本論文進行了TFV對ZF4的感染實驗。研究發(fā)現(xiàn)ZF4細胞在感染TFV之后會出現(xiàn)典型的CPE，并且通過透射電鏡觀察到在ZF4細胞內(nèi)晶格狀整齊排列的TFV病毒粒子