兩種虹彩病毒ISKNV和TFV的細(xì)胞感染研究.pdf

1、傳染性脾腎壞死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)是重要養(yǎng)殖魚類鱖魚(Siniperca chuami)暴發(fā)性流行病的病原，為虹彩病毒科(Iridoviridae)，細(xì)胞腫大病毒屬(Megalocytivirus)的代表種?；⒓y蛙病毒(tigerfrog virus，TFV)是使養(yǎng)殖虎紋蛙蝌蚪(Rana tigrina rugulosa)和中華鱉(Trionyxsin

2、ensis)發(fā)病致死的主要病原，屬于虹彩病毒科，蛙病毒屬(Ranavirus)。 本研究用ISKNV對(duì)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有魚類細(xì)胞系進(jìn)行了敏感細(xì)胞系篩查，結(jié)果沒有找到可感染ISKNV的細(xì)胞系?；诖?，開展了鱖魚多種組織及仔魚的原代細(xì)胞培養(yǎng)工作。其中鱖魚心臟和腦的原代細(xì)胞在傳代至9代左右時(shí)無法繼續(xù)維持；鰭條細(xì)胞(MF)可傳代至13代，無法繼續(xù)培養(yǎng)；腎細(xì)胞(MK)生長情況良好，可傳代培養(yǎng)至13代左右；鱖魚仔魚細(xì)胞(M-Fry)在傳至30余代

3、后仍保持良好狀態(tài)，存活一年多，營養(yǎng)條件及培養(yǎng)環(huán)境基本穩(wěn)定，有望建立成熟細(xì)胞系。通過ISKNV攻毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)M-Fry、MK和MF在感染ISKNV后均可以出現(xiàn)細(xì)胞病理變化(cytopathognic effect，CPE)，但并非典型的病毒空斑現(xiàn)象。逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果證實(shí)該病毒確實(shí)在這三種細(xì)胞中發(fā)生轉(zhuǎn)錄。通過電子顯微鏡觀察只在M-Fry細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有二十面體結(jié)構(gòu)的ISKNV病毒粒子。利用對(duì)ISKNV敏感的M-Fry細(xì)胞，進(jìn)行病毒部分基因的轉(zhuǎn)錄

4、分析，獲得ISKNV部分基因表達(dá)時(shí)相的同時(shí)，也證實(shí)M-Fry細(xì)胞可作為ISKNV全基因組轉(zhuǎn)錄時(shí)相分析的有力工具，為ISKNV全部ORF的劃分、聚類提供更多實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 TFV病毒已知其有多種魚類敏感細(xì)胞系。由于斑馬魚胚胎細(xì)胞系ZF4的建立使其成為體外及細(xì)胞水平研究的有力工具，本論文進(jìn)行了TFV對(duì)ZF4的感染實(shí)驗(yàn)。研究發(fā)現(xiàn)ZF4細(xì)胞在感染TFV之后會(huì)出現(xiàn)典型的CPE，并且通過透射電鏡觀察到在ZF4細(xì)胞內(nèi)晶格狀整齊排列的TFV病毒粒子