兩種藍(lán)藻對WSSV潛伏感染對蝦的影響.pdf

1、在以往的對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)跟蹤調(diào)調(diào)研中,發(fā)現(xiàn)蝦池藻相結(jié)構(gòu)及變化與蝦病發(fā)生有一定相關(guān)性,蝦池優(yōu)勢藍(lán)藻與養(yǎng)殖對蝦疾病的爆發(fā)存在著某些方面的聯(lián)系,可能成為 WSS爆發(fā)的潛在危機(jī)。但蝦池優(yōu)勢微藻、WSSV、養(yǎng)殖對蝦三者之間具有怎樣的關(guān)系?相關(guān)的研究報道尚鮮見。本研究以蝦池的三種優(yōu)勢微藻(蛋白核小球藻、銅綠微囊藻,綠色顫藻)為對象,研究了三種優(yōu)勢微藻與游離WSSV的關(guān)系、三種優(yōu)勢微藻對對蝦的影響、兩種優(yōu)勢藍(lán)藻對WSSV感染對蝦的影響。主要內(nèi)容如下:

2、r>　　1.三種蝦池優(yōu)勢微藻與環(huán)境游離WSSV的關(guān)系
　　采用BG11培養(yǎng)液對銅綠微囊藻、綠色顫藻和蛋白核小球藻進(jìn)行培養(yǎng),三種微藻分別設(shè)置高密度組、中密度組、低密度組,同時設(shè)置對照組(不加藻)。在各實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)液中分別加入WSSV粗提液,使WSSV初始濃度為4.32×105copies/ml。分別在第2h,24h,72h,120h吸取藻液,離心分離上清,沉淀的藻體用PBS重懸,以熒光定量PCR檢測上清及藻體懸浮液中的WSSV拷貝數(shù)

3、,同時計算藻細(xì)胞數(shù)量。采用偏相關(guān)分析法分析藻體WSSV量、上清WSSV量及藻細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn),2h時,銅綠微囊藻、綠色顫藻和蛋白核小球藻三種微藻的高、中、低密度組上清WSSV量均為105copies/ml,高、中、低密度組藻體WSSV量分別為104 copies/ml、104copies/ml和103copies/ml。24h時,三種微藻的高、中、低密度組上清的WSSV量分別降低了98.1％、97.9％、87.6％,

4、高、中密度組藻體的WSSV量分別降低了98.6％、90.1％,均較2h時降低了一到兩個數(shù)量級,降低幅度均達(dá)到顯著(P<0.05),低密度組藻體WSSV量降低量不顯著(P>0.05)。72h時,各組上清和藻體的WSSV量繼續(xù)減少,絕大部分游離WSSV已消失。偏相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),藻體攜帶WSSV量與藻細(xì)胞數(shù)量無顯著的相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。各組的WSSV總量均呈持續(xù)下降趨勢,其中各密度微藻組WSSV總量在24h內(nèi)降低至104copies/ml

5、~103copies/ml,對照組仍為105copies/ml;各密度微藻組WSSV總量在72h內(nèi)降低至103copies/ml,對照組仍為104copies/ml,微藻組總WSSV量降低速度均比對照組快。結(jié)果表明,銅綠微囊藻、綠色顫藻、蛋白核小球藻均能夠攜帶少量的WSSV,其攜帶量隨時間的延長而不斷減少,藻體 WSSV攜帶量與藻細(xì)胞數(shù)的相關(guān)性不顯著,三種微藻均能夠加快水體游離WSSV數(shù)量的消減。
　　2.三種蝦池優(yōu)勢微藻對對蝦的

6、影響
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)置1.2×106cells/ml的銅綠微囊藻、綠色顫藻、蛋白核小球藻的活藻組及死藻組和池塘水組、對照組共8個組。其中,池塘水組直接使用對蝦養(yǎng)殖池塘水體,含有較豐富的有機(jī)質(zhì)和約104cells/ml的微藻(主要為柵藻、小球藻、平裂藻等);三種微藻的活藻組及死藻組和對照組均使用經(jīng)沉淀池處理后的水源,含有機(jī)質(zhì)少,未發(fā)現(xiàn)微藻;對照組不加微藻。各組均放入10尾經(jīng)檢測WSSV陰性的凡納濱對蝦,于每天9:00、15:00、22:

7、00檢查各組死蝦情況,并計算對蝦累計死亡率。
　　結(jié)果顯示,銅綠微囊藻活藻組和死藻組對蝦累積死亡率同步上升,均顯著高于池塘水組和對照組。42h時,活藻組和死藻組對蝦死亡率分別達(dá)到了94％和87％,而池塘水組對蝦死亡率為37％,對照組僅為3％;90h時,活藻組和死藻組對蝦死亡率達(dá)到100％,池塘水組和對照組對蝦死亡率僅為50％和13％。綠色顫藻活藻組和死藻組對蝦累積死亡率幾乎同步上升,144h時活藻組、死藻組對蝦死亡率均接近80％,

8、明顯高于池塘水組的57％和對照組的2％。小球藻活藻組對蝦死亡率與對照組情況相似,死藻組對蝦死亡率上升較快,144h時,活藻組對蝦死亡率僅為23％,死藻組達(dá)到了70％。實(shí)驗(yàn)過程中,各組活藻細(xì)胞均基本保持初始密度,水體pH、溫度和溶解氧均在對蝦適宜的生存范圍內(nèi)。結(jié)果表明,銅綠微囊藻、綠色顫藻的活藻環(huán)境和死藻環(huán)境均會對對蝦造成脅迫,加速對蝦死亡,蛋白核小球藻的活藻環(huán)境不會對對蝦產(chǎn)生不良影響,但死藻環(huán)境會加速對蝦死亡。
　　3.兩種蝦池優(yōu)

9、勢藍(lán)藻對WSSV感染對蝦的影響
　　設(shè)置1.2×106cells/ml的綠色顫藻、銅綠微囊藻活藻組和死藻組、陽性對照組、陰性對照組?；钤褰M、死藻組及陽性對照組各放入WSSV人工注射感染對蝦,陰性對照組放入經(jīng)檢測WSSV陰性對蝦。于每天9:00、15:00、22:00檢查各組死蝦情況,并計算對蝦累計死亡率。
　　結(jié)果顯示,各組對蝦累積死亡率均呈逐漸上升趨勢。綠色顫藻活藻組和死藻組的對蝦死亡率在63 h以后迅速上升,144h時活