31297.斑馬魚虹彩病毒感染免疫相關基因的篩選與功能研究

1、中山大學博士學位論文斑馬魚虹彩病毒感染免疫相關基因的篩選與功能研究姓名：齊麟申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：徐安龍20090610中山大學博士學位論文：斑馬魚虹彩病毒感染免疫相大基因的篩選與功能研究抗性相關、細胞骨架、生物合成、能量相關、蛋白修飾、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄和翻譯因子、代謝相關、病毒相關和其它共lO個大類的基因。其中，生物合成類基因所占比例最大，達到247％，抗性和免疫相關基因占233％。推測這兩類基因在斑馬魚

2、感染ISKNV后具有重要的意義。(3)系統(tǒng)研究了一個TNF家族成員(TTRAP)在抗病毒感染免疫中的作用。研究發(fā)現(xiàn)：TTRAP在斑馬魚感染ISKNV后明顯上調(diào)，與病毒感染正相關。對TTRAP在正常成魚各組織和胚胎發(fā)育時期表達譜進行了研究，證實TTRAPmRNA水平在除腦以外的lO個組織中都有表達，在腸道等與黏膜免疫密切相關的組織中高表達；胚胎發(fā)育方面，從魚卵受精后6小時到48小時，TTRAPmRNA水平持續(xù)上升，之后保持穩(wěn)定。通過激光共

3、聚焦分析發(fā)現(xiàn)全長TTRAP定位于細胞核中，且核定位信號位于TTRAP蛋白的N端。TTRAP是TNF家族中具有負調(diào)控功能的轉(zhuǎn)錄因子，一方面，能增強IFN信號通路，推測TTRAP具有抗病毒功能；另一方面，能抑制NF1cB信號通路，推測TT凡鐘具有防止病毒通過對抗調(diào)亡逃避宿主免疫清除的功能。成功構建TTRAP原核表達載體，誘導表達出融合蛋白，并獲得兔源多克隆抗體，為具體功能研究奠定了基礎。(4)對斑馬魚急性應答蛋白血清淀粉樣蛋白A(serum

4、amyloid氣SAA)進行初步功能研究并發(fā)現(xiàn)：SAA除對細菌和細菌內(nèi)毒素敏感外，對病毒和病毒純組份PolyI：C的刺激同樣表現(xiàn)出急性應答作用。定量PCR研究表明，SAA在生殖器官卵巢和精巢中高表達。首次發(fā)現(xiàn)斑馬魚SAA廣譜的菌結合能力，除有報道的格蘭氏陰性菌外，還能直接結合兩種格蘭氏陽性菌(Saureus和Sepidermidis)。對免疫相關信號通路進行分析發(fā)現(xiàn)，斑馬魚SAA能激活NFrB和ISRE信號通路，推測SAA具有增強炎癥效