RT-PCR方法在遺傳病檢測中的應(yīng)用.pdf

1、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)是一種將RNA反轉(zhuǎn)錄和PCR結(jié)合起來建立的一種RNA的聚合酶鏈反應(yīng)，其優(yōu)點是快速、簡便且敏感性極高。可用于：①分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物以用于檢測突變和基因表達的強度；②克隆cDNA及合成cDNA探針、改造cDNA序列等。 本課題將RT-PCR方法和巢式PCR方法相結(jié)合，用于脆性X綜合征(FXS)、血友病A(HA)和Duchenne/Becker肌營養(yǎng)不良癥(DMD)患者的基因檢測。 FXS是

2、一種發(fā)病率僅次于先天愚型的遺傳性智能低下X連鎖隱性遺傳病，占X連鎖智能低下的40％，95％以上的脆性X綜合征患者發(fā)病的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)是FMR1基因(CGG)n結(jié)構(gòu)擴展的動態(tài)突變，當(dāng)n＞200時，F(xiàn)MR1基因5’(CGG)n側(cè)CpG島異常甲基化，使FMR1基因無表達，故檢測不到cDNA產(chǎn)物。 DMD/BMD是人類常見的致死性X連鎖隱性遺傳的神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為由于基因突變而導(dǎo)致的骨骼肌無力和小腿腓腸肌假性肥大。因DMD基因約2

3、500kb，從DNA水平檢測，最新的MLPA技術(shù)只能檢測到約65％為缺失，而微小改變只能通過逐個外顯子的測序，即使這樣仍然有一些病例無法檢測到DMD基因的改變，而對只有基因長度0.5％的大約14kb的cDNA進行分析，不僅可以檢測到缺失、插入，還可以直接檢測到RNA加工的異常，對其余的微小突變，用cDNA進行突變檢測也較gDNA易行。 HA是由于血漿中凝血因子Ⅷ(FⅧ)缺乏所致的X連鎖隱性遺傳的凝血缺陷疾病，其中內(nèi)含子22和內(nèi)含