成年大鼠嗅鞘細胞的純化培養(yǎng)及其增殖劑的研究.pdf

1、目的： ①運用改良差速貼壁法+無血清條件培養(yǎng)液來純化培養(yǎng)嗅鞘細胞，以期建立一種新穎、經濟、簡單、實用的純化培養(yǎng)成年大鼠嗅鞘細胞的方法。 ②全面探討有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin與堿性成纖維生長因子(bFGF)對嗅鞘細胞生長增殖的影響，以及多種增殖劑聯(lián)合干預嗅鞘細胞的效果，以期解決基礎與臨床研究中嗅鞘細胞數(shù)量及來源有限的問題。 方法： ①將無菌條件下取材、消化的嗅鞘單細胞混懸液分為三份：單純改良差速貼

2、壁組、單純無血清條件培養(yǎng)液純化組和改良差速貼壁+無血清條件培養(yǎng)液純化組。各組按要求分別行12 h+24 h差速貼壁純化和預先制備的含同源嗅鞘培養(yǎng)上清液的無血清條件培養(yǎng)液孵育純化36～48 h，運用倒置顯微鏡觀察和細胞免疫熒光染色法評估和檢測各組嗅鞘細胞的活力和純度。 ②純化的嗅鞘細胞按照隨機化原則分為六組：空白對照組、有血清條件培養(yǎng)液組、Forskolin組、bFGF組、Forskolin+bFGF組和三聯(lián)合干預組。應用BrdU

3、(5-bromodeoxyuridine)摻入法和MTT活性檢測法全面評估各增殖劑及其聯(lián)合試劑對嗅鞘細胞生長增殖的影響效果。 結果： ①改良差速貼壁+無血清條件培養(yǎng)液可以使原代培養(yǎng)的嗅鞘細胞純度達到88％～92％，明顯優(yōu)于其它兩組純化對照組。 ②有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin較空白對照組可以促進嗅鞘細胞的活性(P<0.05)，其增值效應相對緩和。bFGF對嗅鞘細胞的增殖效果比較強烈，較空白對照組可以明顯促進

4、嗅鞘細胞活性(P<0.001)。此外，F(xiàn)orskolin+bFGF和有血清條件培養(yǎng)液+Forskolin+bFGF聯(lián)合干預組均可大幅度地提高嗅鞘細胞的數(shù)量(P<0.001)，三種增殖劑組合應用有明顯的疊加效果。 結論： ①運用改良差速貼壁法+無血清條件培養(yǎng)液法可以建立起完善的成年大鼠嗅鞘細胞培養(yǎng)純化新理論。 ②有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin與bFGF對嗅鞘細胞均有增殖效應。三種干預因素的聯(lián)合作用可以大幅度的