原代培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞與異種神經(jīng)支架共培養(yǎng)研究.pdf

1、目的：1、采用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化的方法培養(yǎng)大鼠乳鼠的嗅鞘細(xì)胞，并對細(xì)胞分泌的神經(jīng)生長因子進(jìn)行檢測。2、將原代培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞與異種神經(jīng)支架在體外共同培養(yǎng)，觀察在體外環(huán)境下支架對細(xì)胞的生長是否有影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)一：取10只SD大鼠的乳鼠（鼠齡7d），取乳鼠的嗅球，應(yīng)用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化3 min的方法培養(yǎng)細(xì)胞；對細(xì)胞進(jìn)行神經(jīng)生長因子的檢測，細(xì)胞密度調(diào)整到密度1×106/ml，接種到24孔板內(nèi)，每組密度又分為3

2、d組、5d組、7d組、9d組，神經(jīng)生長因子酶聯(lián)反應(yīng)檢測不同時間點(diǎn)細(xì)胞在分泌生長因子量上的差異。實(shí)驗(yàn)二：萃取異種神經(jīng)（青紫藍(lán)兔脛神經(jīng)）支架，對萃取后神經(jīng)進(jìn)行HE染色、S-100、Laminin免疫組織化學(xué)染色；在體外將嗅鞘細(xì)胞與異種神經(jīng)支架進(jìn)行共培養(yǎng)，通過掃描電鏡觀察細(xì)胞與支架的共存情況；神經(jīng)生長因子酶聯(lián)反應(yīng)檢測單純嗅鞘細(xì)胞（對照組）、嗅鞘細(xì)胞與支架共培養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)組）在3d、5d、7d、9d不同時間點(diǎn)上神經(jīng)生長因子分泌上是否存在差異。

3、>　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：應(yīng)用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化3min的方法能夠培養(yǎng)出的較高濃度的嗅鞘細(xì)胞，細(xì)胞純度能夠達(dá)到70％；統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)經(jīng)胰酶限時消化3 min后的嗅鞘細(xì)胞分泌的神經(jīng)生長因子含量隨時間的延長而逐漸減少。胰酶消化后第3d神經(jīng)生長因子分泌的含量最高（P=0.012 P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)二：萃取后的異種神經(jīng)支架鏡下未見雪旺氏細(xì)胞和髓鞘結(jié)構(gòu)，神經(jīng)基底膜、內(nèi)膜、束膜和外膜均存在；嗅鞘細(xì)胞能夠貼附生長在異種神經(jīng)支架上；實(shí)驗(yàn)組與對照組在

4、3d、5d、7d、9d四個不同時間點(diǎn)神經(jīng)生長因子的分泌量上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）
　　結(jié)論：1、聯(lián)合培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞的方法能獲得更高濃度的嗅鞘細(xì)胞，細(xì)胞濃度能夠達(dá)到70%，能夠滿足后期移植對細(xì)胞的要求。2、聯(lián)合培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞在細(xì)胞生長到大約10d（胰酶限時消化后3d）的時候分泌的神經(jīng)生長因子量最多。3、萃取后的異種神經(jīng)支架能夠滿足作為載體支架的要求。4、原代培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞能夠抓附在神經(jīng)支架上生長。5、嗅鞘細(xì)胞與支架共同培