神經(jīng)干細胞、嗅鞘細胞移植治療大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、第一部分:人及大鼠神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定;該研究取孕16天SD大鼠胚胎大腦皮層組織,或新生3天的SD大鼠海馬組織,孕3月人胚胎大腦皮層組織或孕4.5~7月人胚胎海馬組織,通過無血清培養(yǎng)技術(shù),在體外進行傳代培養(yǎng)獲取神經(jīng)干細胞,并對其分裂、分化等特點進行研究和比較.第二部分:人及大鼠嗅鞘細胞的分離培養(yǎng)及鑒定;該研究采用無血清培養(yǎng)技術(shù)、對嗅鞘細胞理化特性影響較小的純化方法進行定量培養(yǎng),并進行相關(guān)鑒定.第三部分:大鼠神經(jīng)干細胞移植治療陳舊性

2、脊髓挫傷的實驗研究;該研究參照Allen方法制成大鼠陳舊性脊髓挫傷動物模型,將傳至第二代的RNSCs以1×10<'11>/L采用立體定向技術(shù)移植入大鼠脊髓挫傷區(qū),采用Tarlov評分、斜板試驗、爬梯試驗、CBS聯(lián)合評分、電生理檢查、磁共振檢查、HRP神經(jīng)示蹤、HE染色、透射電鏡觀察、免疫組化檢測和圖像分析等方法研究RNSCs移植后大鼠的功能恢復(fù)和RNSCs在脊髓內(nèi)的分布、分化.第四部分:大鼠嗅鞘細胞移植治療陳舊性脊髓挫傷的實驗研究;該研

3、究參照Allen方法制成大鼠陳舊性脊髓挫傷動物模型,將培養(yǎng)15天的ROECs以1×10<'11>/L采用立體定向技術(shù)移植入大鼠脊髓挫傷區(qū),采用Tarlov評分、斜板試驗、爬梯試驗、CBS聯(lián)合評分、電生理檢查、磁共振檢查、HRP神經(jīng)示蹤、HE染色、透射電鏡觀察、免疫組化檢測和圖像分析等方法研究ROECs移植后大鼠的功能恢復(fù)和ROECs在脊髓內(nèi)的分布、分化.第五部分:大鼠神經(jīng)干細胞與嗅鞘細胞聯(lián)合移植治療陳舊性脊髓挫傷的實驗研究;該研究首次嘗

4、試將二者聯(lián)合移植以探索療效是否更佳.該研究參照Allen方法制成大鼠陳舊性脊髓挫傷動物模型,將傳至第二代的RNSCs和培養(yǎng)15天的ROECs按3:2混合、1×10<'11>/L濃度采用立體定向技術(shù)移植入大鼠脊髓挫傷區(qū),采用Tarlov評分、斜板試驗、爬梯試驗、CBS聯(lián)合評分、電生理檢查、磁共振檢查、HRP神經(jīng)示蹤、HE染色、透射電鏡觀察、免疫組化檢測和圖像分析等方法研究RNSCs+ROECs移植后大鼠的功能恢復(fù)和RNSCs+ROECs在

5、脊髓內(nèi)的分布、分化.第六部分:SD大鼠神經(jīng)干細胞、嗅鞘細胞移植后大鼠的細胞免疫及體液免疫變化;該研究試圖通過檢測神經(jīng)干細胞和/或嗅鞘細胞移植后SD大鼠的細胞免疫(CD3、CD4、CD8)和體液免疫指標(IgG、IgA、IgM),對移植后機體的免疫應(yīng)答狀態(tài)作一比較.該研究發(fā)現(xiàn),大鼠神經(jīng)干細胞、嗅鞘細胞或二者聯(lián)合移植后,大鼠細胞免疫和體液免疫指標較對照組和正常大鼠無顯著性差別,該研究首次證實神經(jīng)干細胞、嗅鞘細胞移植或二者聯(lián)合移植術(shù)后12周存