2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩141頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、壬基酚(Nonylphenol,NP)是環(huán)境雌激素樣化學物的典型代表,作為乳化劑廣泛應用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、日用品生產(chǎn)中,可由污水排入水體環(huán)境。NP在環(huán)境中難于降解,具有高度脂溶性和生物蓄積性,可經(jīng)口腔、呼吸道、皮膚等多種途徑進入機體,對人群健康產(chǎn)生危害。
  研究估計,非職業(yè)暴露人群通過各種途徑接受NP的暴露水平為3.6~31.4μg/kg/day。體內、外實驗顯示NP的雌激素活性約為雌二醇的10-4~10-5倍,可模擬雌激素與機體內

2、多組織器官的雌激素受體結合發(fā)揮雌激素樣作用,目前較多關于NP生殖和發(fā)育毒性的研究表明,NP的毒性機制主要源于其對內分泌的干擾作用,可對魚類、兩棲動物及哺乳動物多種器官產(chǎn)生不良作用:包括影響生殖、內分泌、免疫、消化、泌尿等系統(tǒng)的功能,然而NP對子代神經(jīng)行為發(fā)育的影響目前尚不清楚。
  中樞神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育時期對體內多種激索水平的變化非常敏感,相對成人而言,胎兒在胚胎中后期和哺乳期,血腦屏障未發(fā)育成熟,中樞神經(jīng)系統(tǒng)正值器官形成期,此時期

3、最易受外來毒物損害,其神經(jīng)系統(tǒng)器官發(fā)育和功能很可能受到影響。因此,若機體此期間若暴露于內分泌干擾物NP,可能導致胎兒神經(jīng)系統(tǒng)所受的損害會比其它時期更為嚴重。以往研究大多是多種環(huán)境內分泌干擾物(EnvironmentalEndocrine Disrupters,EEDs)的聯(lián)合暴露,不能說明NP單獨的毒性作用,得出的結果也各不相同,因此結論尚具有不確定性,對機理的研究較片面,缺乏深入而系統(tǒng)的研究。
  本課題以大鼠為研究對象,首次在

4、神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育敏感期暴露NP,觀察NP對仔鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響,測試其學習記憶能力的變化,并從細胞凋亡、神經(jīng)營養(yǎng)因子、膠質細胞纖維酸性蛋白、信號傳遞等角度進行研究,同時利用基因芯片從分子水平嘗試探討NP神經(jīng)毒性的分子機制,進而可為NP在發(fā)育期間暴露的危害評價提供實驗數(shù)據(jù),為制定相關環(huán)境污染標準提供理論依據(jù)。
  第一部分,NP對母鼠生殖和仔鼠生長發(fā)育的影響
  目的:研究NP對雌性大鼠生產(chǎn)和仔鼠生長發(fā)育的影響。
  

5、方法:SD孕鼠28只隨機分為4組(對照組、50mg/kg NP、100mg/kgNP、200mg/kg NP),每組6~7只,妊娠第9~15天灌胃NP,觀察孕鼠的體重、進食、染毒后的一般情況以及生殖情況,觀察仔鼠的出生指標及體重變化,檢測仔鼠早期生理發(fā)育指標。
  結果:(1)各實驗組孕鼠末見明顯中毒癥狀,100mg/kg(中劑量組)和200mg/kg(高劑量組)NP組孕鼠每窩平均胎數(shù)、活胎數(shù)降低,死胎數(shù)增加,p<0.05。(2)

6、高劑量組仔鼠身長、尾長、肛殖距縮短,p<0.05。(3)各實驗組仔鼠出生臟器重量(腦,肝、腎、心等)與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義,p>0.05。(4)高劑量組體重出生后1、7、14、21、28天均低于對照組,p<0.01。(5)高劑量組仔鼠早期生理發(fā)育指標(張耳、開眼、長毛、出牙)發(fā)育時間較對照組延長,p<0.05。以上指標低劑量組與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義,p>0.05。
  結論:在本實驗的染毒方式、時間和劑量下,高劑量組

7、NP對雌鼠的生殖能力有影響,同時可影響仔鼠的出生指標和生長發(fā)育指標。
  第二部分,NP對仔鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響
  目的:探討母鼠NP孕期暴露致子代神經(jīng)行為發(fā)育及學習記憶的影響。
  方法:孕鼠染毒及分組方法同第一部分。在出生后特定的時間,觀察仔鼠斷崖回避、平面翻正、前肢懸掛、空中翻正、聽覺驚愕和視覺定位等早期神經(jīng)行為發(fā)育指標,選擇8周齡仔鼠進行Morris水迷宮和跳臺試驗,檢測NP對其學習記憶的影響;脫椎取腦組織做

8、石蠟切片HE染色光鏡下觀察其病理變化;海馬組織透射電鏡觀察超微結構變化。
  結果:(1)早期神經(jīng)行為發(fā)育指標:高劑量組仔鼠(斷崖回避、平面翻正、前肢懸掛、空中翻正、聽覺驚愕和視覺定位等)時間較對照組延長(p<0.05);(2)Morris水迷宮試驗:高劑量組仔鼠水迷宮中逃避潛伏期延長(p<005);(3)跳臺試驗:反應時間延長,步下潛伏期縮短,錯誤次數(shù)增加(p<005);(4)病理:HE染色,光鏡可見高暴露組海馬組織充血水腫;(

9、5)透射電鏡:高劑量組仔鼠海馬組織電鏡下見線粒體腫脹呈空泡樣變,染色質濃縮成塊狀聚集在核周圍。
  結論:NP孕期暴露可阻礙仔鼠早期神經(jīng)行為的發(fā)育,使空間學習記憶能力下降。
  第三部分,NP對斷乳期仔鼠海馬基因表達譜的影響
  目的:應用基因芯片技術,考察NP暴露組和對照組仔鼠海馬組織差異基因的表達狀況,篩選部分與神經(jīng)毒性相關的差異表達基因及通路進行進一步機制研究。
  方法:建立孕期和哺乳期暴露NP的仔鼠模型

10、,提取暴露組和對照組出生1天仔鼠海馬組織mRNA,采用Roche Nimblegen公司生產(chǎn)的12×135位點的包含大鼠26,419個基因的表達譜基因芯片,檢測腦基因的表達,掃描儀進行掃描及處理數(shù)據(jù)。
  結果:暴露組與對照組共有1,254個差異表達基因,其中619個基因上調,635個基因下調。部分與神經(jīng)系統(tǒng)功能相關差異表達基因為:A.神經(jīng)營養(yǎng)相關的基因表達:甘丙肽(Galanin,Gal)基因下調,神經(jīng)生長因子(Nerve Gr

11、owth Factor,NGF)基因下調;B.細胞凋亡的相關基因的表達:凋亡蛋白酶活化因子-1(Apoptotic Protease Activating Factor-1,Apaf-1)基因上調,凋亡抑制基因-1(Defender Against Apoptotic Death-1,DAD1)基因下調,半胱氨酸蛋白酶7(Cysteine-aspartic Acid Protease,Caspase7)基因上調;C.信號傳遞及離子通道相

12、關基因的表達:谷氨酸鹽受體(Glutamate Receptor,Ionotropic,AMPA2)基因下調,鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/calmodulin-dependent Protein KinaseⅡ Delta,Camk2d)基因下調。
  結論:芯片結果提示:NP能導致仔鼠海馬神經(jīng)元信號傳導、免疫應答、細胞凋亡、炎癥反應因子、神經(jīng)膠質細胞發(fā)育等相關基因的差異表達,以上改變有可能干擾神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能的發(fā)

13、揮。
  第四部分,NP暴露對仔鼠神經(jīng)發(fā)育毒性的機制研究
  目的:母鼠孕期及哺乳期暴露NP,觀察對子代神經(jīng)細胞凋亡、神經(jīng)遞質、膠質細胞以及神經(jīng)生長相關基因的表達變化,探討NP對仔鼠神經(jīng)毒性的可能機制。
  方法:將交配成功的31只孕鼠根據(jù)妊娠日期分層后隨機分配到4組,即C、L、M、H組(NP0、25、50、100mg/kg/day),單籠飼養(yǎng),空腹灌胃,NP暴露時間為受孕第6天到出生后21天哺乳期結束(GD6~PND

14、21),放免法檢測21天仔鼠血清雌二醇(E2)和睪酮(TT)水平;分光比色法測仔鼠海馬組織膽堿乙酰轉移酶(ChAT)和膽堿酯酶(AchE)活性;免疫組化發(fā)觀察海馬組織即早基因c-fos和c-jun蛋白的表達;原位末端標記法(TUNEL)觀察PND21天和60天仔鼠海馬神經(jīng)元凋亡發(fā)生情況;免疫組織化學法檢測海馬和皮質星形膠質細胞膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)生長相關因子(GAP-43)的蛋白的變化,RealTime PCR法檢測GF

15、AP和GAP-43 mRNA的變化,并分析上述指標變化與NP暴露劑量之間的關系。
  結果:①NP對斷乳期仔鼠血清激素水平的影響:放免法檢測結果顯示,仔鼠出生后21天血清睪酮水平隨NP暴露劑量增加而降低,存在劑量-效應關系(r=-0.889,p<0.05),與對照組比較,M和H兩個劑量組睪酮明顯降低(p<0.05);雌激素水平與NP暴露劑量正相關(r=-0.462,p<0.01),H劑量組雌激素水平與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(p

16、<0.05)。②NP暴露對斷乳期及成熟期仔鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響:TUNEL法檢測結果顯示,仔鼠出生后21d和60d,H劑量組海馬細胞凋亡率顯著高于對照組(p<0.01),且NP暴露劑量與凋亡率正相關(r=0.836、0.521,p<0.05)。從縱向比較,各暴露組21天仔鼠海馬組織凋亡率均高于60天(t=3.331,p<0.05)③NP對仔鼠神經(jīng)信號傳導的影響:A.NP對仔鼠海馬組織ChAT和AchE活性的影響:M、H劑量組仔鼠海馬組織

17、ChAT活性明顯低于對照組;M劑量組AchE活性高于對照組(p<0.01)。海馬組織ChAT和AchE活性與NP暴露劑量有劑量效應關系(r=-0.821、0.757,p<0.05)。B.海馬組織c-fos和c-jun蛋白表達的變化:正常仔鼠海馬中c-jun和c-fos蛋白表達很低,L劑量組陽性細胞數(shù)少,著色淺;M和H劑量組仔鼠海馬c-jun和c-fos陽性細胞數(shù)量增多,尤其是高劑量組分布密集,胞體大、著色深。④NP對仔鼠海馬星形膠質細胞

18、膠質原纖維酸性蛋白的影響:免疫組化技術檢測GFAP蛋白表達的結果顯示,H劑量組21d和60d齡的仔鼠海馬和皮質部GFAP免疫陽性反應細胞數(shù)目、積分光密度顯著高于同期對照組仔鼠(p<0.05),熒光定量PCR檢測GFAP表達的結果顯示,H劑量組21d和60d齡的仔鼠海馬GFAP mRNA表達升高,與對照組比較有顯著性差異。GFAP蛋白與GFAP mRNA表達與NP暴露劑量有正相關關系(p<0.05)。⑤NP對仔鼠神經(jīng)生長相關蛋白的影響:免

19、疫組化技術檢測GAP-43蛋白表達的結果顯示,H劑量組21d和60d齡的仔鼠海馬和皮質部GAP-43免疫反應陽性細胞平均數(shù)目、積分光密度低于同期對照組仔鼠(p<0.05),熒光定量PCR結果顯示,H劑量組21d和60d齡的仔鼠海馬GAP-43 mRNA表達下降,差異有統(tǒng)計學意義。GAP-43蛋白和GAP-43 mRNA表達與NP暴露劑量有負相關關系(p<0.05)。
  結論:結合以上數(shù)據(jù),推測NP誘導的神經(jīng)毒性可能機制是:在胚胎

20、期及哺乳期接觸NP,NP的弱雌激素樣作用通過競爭雌激素受體引起內分泌系統(tǒng)失衡,導致仔鼠體內雌激素水平升高,改變了子代大腦發(fā)育的內分泌環(huán)境,干擾神經(jīng)細胞發(fā)育過程,降低神經(jīng)營養(yǎng)因子GAP-43的表達水平,抑制神經(jīng)細胞分化,包括神經(jīng)突起生長和分支,突觸的形成,同時通過增加膠質細胞纖維酸性蛋白GFAP表達,并影響星形膠質細胞的形態(tài)、結構和功能,進一步影響膽堿能神經(jīng)遞質Ach以及即早基因c-jun、c-fos的信息傳遞,并且誘導仔鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論