重組脂聯(lián)素對氧化損傷下內(nèi)皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關信號分子的影響.pdf

1、目的：探討重組脂聯(lián)素對第三丁基過氧化氫(t-BHP)誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)凋亡是否存在影響，同時觀察重組脂聯(lián)素對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關信號通路IRE1α-JNK的影響。
　　 方法：應用不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導HUVECs1～24 h，MTT法觀察t-BHP作用后細胞的存活率；Hochest/PI染色熒光顯微鏡觀測細胞凋亡形態(tài)；Western blot檢測t-BHP誘導HU

2、VECs凋亡過程中細胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達水平的變化。在此基礎上，用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs處理，觀察重組脂聯(lián)素對t-BHP誘導的HUVECs凋亡是否有保護作用，以及細胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關信號分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達水平的變化。
　　 結(jié)果：MTT顯示，不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導HUVE

3、Cs1～24 h后，發(fā)現(xiàn)隨著t-BHP作用濃度的增加和時間的延長，可明顯抑制HUVECs的生長，并呈現(xiàn)一定的量效和時效關系。不同濃度t-BHP處理8 h后，Hochest/PI染色熒光顯微鏡下顯示，隨著t-BHP濃度的增加，HUVECs的損傷更明顯，細胞凋亡率隨之升高；ER應激相關信號蛋白IRE1α、p-JNK及凋亡蛋白Caspase-3表達增加。采用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs預處理，可以明顯減輕t-BHP誘導的HUV