丹酚酸A、C分子藥對配伍對HSA誘導HK-2細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡蛋白的影響.pdf

1、目的：研究丹酚酸A、C分子藥對配伍對HSA誘導HK-2細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡蛋白的影響。
　　方法：在體外培養(yǎng)HK-2細胞，并隨機分成5組：正常組、模型組、丹酚酸A組（SalA組）、丹酚酸C組(SalC組)、丹酚酸A+C組（即配伍組，丹酚酸A、C按1:1的比例配伍）。同步化24h后，除正常組外，其余各組均給予HSA誘導造模，且3個給藥組給予相應的藥物干預共同培養(yǎng)。分組培養(yǎng)干預24h、48h、72h后收集細胞，采用免疫印跡法（WB

2、）檢測GRP78、ATF-4、Caspase-12和CHOP蛋白的定量表達；細胞免疫熒光技術檢測CHOP、ATF-4蛋白的定位表達；流式細胞術（FCM）檢測Caspase-3活化率和細胞凋亡率。
　　結果：1.各時間段各組細胞凋亡率FCM檢測：與正常組比較，三個時間段的模型組細胞凋亡率均明顯增高（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組三個時間段的細胞凋亡率均明顯降低（P＜0.05）；各給藥組比較，配伍組在三個時間段的凋亡率均明顯低

3、于SalA組、SalC組（P＜0.05），SalA、C組在24h、48h時間段差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.各時間段各組細胞Caspase-3活化率FCM檢測：與正常組比較，三個時間段的模型組Caspase-3活化率均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組在三個時間段的Caspase-3活化率均明顯降低（P＜0.05）；各給藥組比較，24h時間段各給藥組Caspase-3活化率無顯著差異（P＞0.05），4

4、8h時間段配伍組、SalA組的Caspase-3活化率明顯低于SalC組（P＜0.05），但SalA組、配伍組的Caspase-3活化率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），72h時間段配伍組Caspase-3活化率均明顯低于SalA組和SalC組（P＜0.05）。
　　3.各時間段各組細胞GRP78蛋白表達WB檢測：與正常組比較，三個時間段模型組細胞GRP78的相對表達量均明顯增多（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組在三個時間段

5、的GRP78相對表達量均明顯減少（P＜0.05）；各給藥組比較，24h時間段SalC組GRP78相對表達量較其他給藥組明顯減少（P＜0.05），各給藥組GRP78在48h時間段的相對表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），72h時間段配伍組 GRP78相對表達量較其他給藥組明顯減少（P＜0.05）。
　　4.各時間段各組細胞Caspase-12蛋白表達WB檢測：與正常組比較，模型組細胞在三個時間段的Caspase-12相對表達量均

6、明顯增多（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組在三個時間段的Caspase-12相對表達量均明顯減少（P＜0.05）；各給藥組比較，配伍組在三個時間段的Caspase-12相對表達量均較其他給藥組明顯減少（P＜0.05）。
　　5.各時間段各組細胞CHOP蛋白表達檢測：①WB檢測結果：與正常組比較，模型組細胞 CHOP的相對表達量在三個時間段均明顯增多（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組在三個時間段的CHOP相對表達量均明顯

7、減少（P＜0.05）；各給藥組比較，三個時間段配伍組CHOP相對表達量較其他給藥組均明顯減少（P＜0.05）。②細胞免疫熒光技術檢測結果：CHOP陽性表達為綠色熒光信號，在 HK-2細胞的表達部位主要位于細胞核。
　　6.各時間段各組細胞ATF-4蛋白表達檢測：①WB檢測結果：與正常組比較，三個時間段模型組細胞ATF-4的相對表達量均明顯增多（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組三個時間段ATF-4相對表達量均明顯減少（P＜0.

8、05）；各給藥組比較，三個時間段配伍組ATF-4相對表達量較其他給藥組均明顯減少（P＜0.05）。②細胞免疫熒光技術檢測結果：ATF-4陽性表達為綠色熒光信號，在HK-2細胞的表達部位主要位于細胞核。
　　結論：丹酚酸A、C及分子藥對配伍對HSA誘導HK-2細胞的GRP78、Caspase-12、CHOP和ATF-4的表達及Caspase-3的活化起抑制作用，推測丹酚酸A、C及分子藥對配伍可能通過影響 HK-2細胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關