Exendin-4對人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激損傷的保護作用.pdf

1、目的:研究艾塞那肽（exendin-4，Ex-4）對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(humanumbilical vein endothelial cells; HUVECs)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激損傷的保護作用。
　　方法:含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液在5％CO2培養(yǎng)箱37℃貼壁培養(yǎng)HUVECs，待細胞平鋪至培養(yǎng)瓶底部80％左右時，采用內(nèi)源性過氧化氫酶抑制物(endogenous peroxidase blocking solution;EP

2、BS)誘導HUVECs凋亡，觀察Ex-4拮抗HUVECs凋亡的作用。實驗分成4組，每組8瓶，包括①正常對照組(n=8):不做任何處理;②Ex-4處理組(n=8):(Ex-4，8μg/ml，45min);③EPBS處理組(n=8):(EPBS，100μL/mL，30 min);④Ex-4預處理+EPBS處理組(n=8):Ex-4預處理(8μg/mL，45min)后，加EPBS(100μL/mL，30min)。激光共聚焦確認HUVECs上存

3、在胰高血糖素樣肽-1受體(glucagon-like peptide-1receptor，GLP-1R);流式細胞儀檢測細胞凋亡率，評價EPBS誘導HUVECs凋亡情況，以及Ex-4預處理對EPBS誘導HUVECs凋亡的影響。Westernblot檢測CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白表達情況，探討Ex-4拮抗HUVECs凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡蛋白的關系。
　　結果:HUVECs上有GLP-1受體表達。EPBS處理組和正

4、常對照組比較，EPBS能顯著增加HUVECs的凋亡率[(52.27±3.66)％vs(7.25±0.62)％，P＜0.01];Ex-4預處理+EPBS處理組與EPBS處理組比較，Ex-4可使EPBS誘導的HUVECs凋亡率明顯降低[(37.77±2.86)％vs(52.27±3.66)％，P＜0.01]。Ex-4處理組和正常對照組比較，Ex-4明顯抑制CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表達（0.68±0.06 vs1.00±0

5、.05，P＜0.01;0.52±0.10 vs1.00±0.06,P＜0.01;0.64±0.10 vs1.00±0.12,P＜0.01;0.68±0.05 vs1.00±0.06，P＜0.01）;EPBS處理組和正常對照組比較，EPBS能增加CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表達（1.76±0.16vs1.00±0.05,P＜0.01;2.48±0.28 vs1.00±0.06,P＜0.01;4.58±0.32 vs1.00

6、±0.12,P＜0.01;2.25±0.10 vs1.00±0.06,P＜0.01）。Ex-4預處理+EPBS處理組和EPBS處理組比較，Ex-4預處理可使EPBS誘導的CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表達顯著降低(0.42±0.05 vs1.76±0.16，P＜0.01;0.66±0.08 vs2.48±0.28,P＜0.01;1.65±0.12 vs4.58±0.32,P＜0.01;1.48±0.08 vs2.25±0.