帕金森病家系GDNF基因啟動子測序及其CpG島甲基化分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討GDNF基因啟動子的變異或其CpG島的異常甲基化與PD家系中PD發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法：從PD家系成員的外周血中提取全血DNA，應(yīng)用引物設(shè)計軟件針對第一啟動子設(shè)計2對引物和3組甲基化和非甲基化引物，第二啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)設(shè)計1對引物和4組甲基化和非甲基化引物；應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)進(jìn)行GDNF基因2個啟動子擴(kuò)增，并用基因測序技術(shù)進(jìn)行測序，然后應(yīng)用DNAstar軟件進(jìn)行序列變異分析。采用甲基化特異性PCR(MS

2、P)技術(shù)擴(kuò)增2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)的甲基化和非甲基化產(chǎn)物，并用瓊脂糖凝膠電泳觀察GDNF基因2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)CpG島的甲基化情況。
　　 結(jié)果：GDNF基因第一個啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)了2個變異位點(diǎn)，是目前已知的多態(tài)位點(diǎn)，即rs2975100(3738C＞T)和rs2075680(4141G＞T)，這2個多態(tài)位點(diǎn)不位于轉(zhuǎn)錄結(jié)合區(qū)；而第二個啟動子區(qū)未發(fā)現(xiàn)變異。GDNF基因2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)的CpG島上無異常甲基化。

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