重組雞α干擾素-白細(xì)胞介素-2復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)外抗病毒活性研究.pdf

1、為了研究重組雞α干擾素/白細(xì)胞介素-2復(fù)合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2，重組復(fù)合蛋白）在雞體內(nèi)外抗病毒活性,本研究采用50％細(xì)胞病變抑制法進(jìn)行了重組復(fù)合蛋白在 CEF細(xì)胞上抗水泡性口炎病毒（VSV）和傳染性法氏囊病病毒（IBDV） LX強(qiáng)毒株的活性研究；采用 MTS法進(jìn)行了重組復(fù)合蛋白促外周血T淋巴細(xì)胞（PBLC）和脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性試驗(yàn)。將IBDV LX強(qiáng)毒株人工感染24日齡SPF雞，分別于攻毒前3d（攻毒前組

2、）、攻毒同時(shí)（同時(shí)組）、攻毒后24h（攻毒后組）使用重組復(fù)合蛋白，以篩選重組復(fù)合蛋白最佳使用時(shí)間試驗(yàn)。將IBDV LX強(qiáng)毒株人工感染24日齡SPF雞，分別肌肉注射重組復(fù)合蛋白（注射組）與滴鼻點(diǎn)眼重組復(fù)合蛋白（滴鼻點(diǎn)眼組）進(jìn)行最佳使用途徑篩選試驗(yàn)。分別通過(guò)臨床觀察、檢測(cè)攻毒前和攻毒后（days post challenge，dpc）不同時(shí)間排毒率、病毒在不同組織器官的動(dòng)態(tài)分布、帶毒時(shí)間、細(xì)胞免疫水平、體液免疫水平和分析外周血淋巴細(xì)胞亞群等

3、指標(biāo)的差異以揭示重組復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)抗病毒和免疫增強(qiáng)作用機(jī)理，并且篩選重組復(fù)合蛋白在雞體內(nèi)發(fā)揮最佳抗病毒活性的最適使用時(shí)間和途徑。
　　結(jié)果：重組復(fù)合蛋白在 CEF細(xì)胞上抗 VSV和 IBDV的活性單位分別為5.24×105 IU/mL和1.64×104IU/mL；重組復(fù)合蛋白具有顯著的促 PBLC和雞脾臟淋巴細(xì)胞的增殖活性。不同時(shí)間使用使用重組復(fù)合蛋白在雞體的抗病毒活性存在差異。同時(shí)組傳染性法氏囊?。↖BD）典型癥狀持續(xù)時(shí)間、病

4、死率、排毒率、外周血持續(xù)帶毒率（72h、20％、31.6%、31.6%）最低，其次是攻毒前組（96h、30％、36.8%、36.2%）、攻毒后組（120h、40%、42.1%、47.4%）和攻毒陽(yáng)性對(duì)照組（168h、70％、57.9%、52.6%）；同時(shí)組和攻毒前組雞組織器官帶毒時(shí)間比攻毒后組和攻毒陽(yáng)性對(duì)照組縮短7d；同時(shí)組的組織器官帶毒率（20.4%）顯著低于攻毒前組和攻毒后組（27.1%、29.2%）；同時(shí)組雞血清抗 IBDV抗體水

5、平顯著低于其它組；同時(shí)組雞的血清中ChIL-2、ChIFN-γ、ChIL-6、ChIL-4表達(dá)水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表達(dá)水平（7 dpc~14 dpc）顯著高于其它組；3 dpc~14 dpc同時(shí)組雞外周血T淋巴細(xì)胞、脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性顯著高于其他試驗(yàn)組；7 dpc~21 dpc攻毒組的CD4+/CD8+的比值顯著低于其相應(yīng)的對(duì)照組，同時(shí)組雞外周血的 CD4+/CD8+的比值顯著高于其他攻毒組。不同途徑使用重

6、組復(fù)合蛋白在雞體的抗病毒活性存在差異。注射組雞 IBD臨床癥狀持續(xù)時(shí)間、病死率、排毒率、外周血持續(xù)帶毒率（96h、30%、54.5%、32％）最低，其次是滴鼻點(diǎn)眼組（120h、50%、81.8%、48％）；注射組雞不同器官的帶毒時(shí)間、抗IBDV抗體水平顯著低于其它組；注射組血清中 ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-r表達(dá)水平（7 dpc~21 dpc）、ChIFN-α表達(dá)水平（7 dpc~14 dpc）、雞外周血 T

7、淋巴細(xì)胞與雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性、外周血中 CD4+/CD8+細(xì)胞的比值最高，其次是滴鼻點(diǎn)眼組和攻毒陽(yáng)性對(duì)照組。
　　結(jié)論：重組復(fù)合蛋白在體外具有顯著的抗 VSV和 IBDV活性及促外周血 T淋巴細(xì)胞、促脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性；重組復(fù)合蛋白通過(guò)提高機(jī)體細(xì)胞因子的表達(dá)水平、增強(qiáng)脾臟淋巴細(xì)胞和外周血 T淋巴細(xì)胞增殖活性、提高 CD4+/CD8+細(xì)胞的比值等方式增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平，發(fā)揮其抗病毒活性；攻毒同時(shí)采用注射途徑使用