茄子花青素合成相關(guān)基因SmMYB的克隆與功能研究.pdf

1、茄子(Solanum melongena L.)是為數(shù)不多富含花青素的蔬菜作物之一。花青素是一種廣泛存在于植物中的天然色素,具有很好的抗氧化性,在藥品、保健品等方面得到了廣泛應(yīng)用,具有很好的市場前景。然而對茄子花青素合成研究還集中于抗氧化性評價(jià)及關(guān)鍵酶基因篩選,對轉(zhuǎn)錄因子的基因克隆及調(diào)控機(jī)制研究尚未見報(bào)道。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴選用表型有明顯差異的茄子種質(zhì)資源作材料。?YZ14?表型為無刺、紫莖、紫花、紫果;?YZ3?表型為

2、有刺、綠莖、白花、白果。采用同源克隆與RACE(rapid amplification of cDNA ends)相結(jié)合的方法克隆了茄子MYB基因cDNA及gDNA全長序列,命名為SmMYB。⑵SmMYB基因cDNA全長1035bp,開放閱讀框從第69bp-905bp處共837個(gè)核苷酸,編碼278個(gè)氨基酸。氨基酸序列比對結(jié)果表明, SmMYB與辣椒(Capsicum annuum L.)MYB轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列相似性達(dá)71％。預(yù)測成熟蛋

3、白的等電點(diǎn)為8.47,具有2個(gè)典型的DNA-binding結(jié)構(gòu)域且亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核,為典型的R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子。gDNA全長3834bp,包含3個(gè)外顯子及2個(gè)內(nèi)含子。⑶用打孔法及削皮法采集茄子果皮,進(jìn)行花青素含量測定,對重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)削皮法采集的果皮花青素含量測定值更高,且數(shù)據(jù)方差相對較小,認(rèn)為削皮法更適合茄子果皮取樣。⑷對茄子根、莖表皮、嫩葉、花瓣、果皮組織進(jìn)行花青素含量測定,檢測結(jié)果顯示,紫茄果皮花青素合成量顯著高

4、于紫茄其他組織及白茄各組織。熒光半定量PCR檢測結(jié)果表明,SmMYB基因表達(dá)水平具有組織特異性,在紫茄果皮中表達(dá)水平顯著高于紫茄其他組織及白茄各組織,認(rèn)為 SmMYB與茄子花青素合成相關(guān)。此外,該基因在白茄各組織中亦有低量表達(dá),推測與SmMYB的表達(dá)模式有關(guān)。⑸對紫茄進(jìn)行不同程度的遮光處理后,分別檢測果皮中花青素含量及SmMYB、SmDFR基因表達(dá)水平。結(jié)果表明,遮光處理顯著抑制紫茄果皮花青素合成及基因表達(dá),且三者變化趨勢相似。進(jìn)一步驗(yàn)