藍(lán)果忍冬果實轉(zhuǎn)錄組測序及花青素合成關(guān)鍵基因的研究.pdf

1、藍(lán)果忍冬（Lonicera caerulea L.）又名藍(lán)靛果，為灌木類小漿果，耐寒性極強，主要分布在半球的寒帶漿果帶，北美和北歐各國。我國主要分布在吉林省長白山、黑龍江省大興安嶺東部山區(qū)、黑龍江東部（勃利縣境內(nèi)）以及內(nèi)蒙古、青海、甘肅、寧夏、新疆等地，是一種北方特色小漿果，具有很高的經(jīng)濟價值和營養(yǎng)保健價值。藍(lán)果忍冬果實中花青素含量豐富，高于一般水果，轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)可以對試驗材料在特定的時間和空間進(jìn)行分析，同時也填補了基因組缺乏的空缺。

2、
　　本研究對不同品種藍(lán)果忍冬成熟果實內(nèi)花青素進(jìn)行了定性與定量測定，分析了總花青素與抗氧化性之間的相關(guān)性，選取了花青素含量高的藍(lán)果忍冬品種蓓蕾作為測序材料，應(yīng)用Illumina HiSeqTM2000平臺對其果實不同生長時期（綠熟期和轉(zhuǎn)色期）進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組de novo測序，通過對花青素含量，花青素合成基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)聯(lián)合分析，初步探討了藍(lán)果忍冬果實中花青素合成的過程，材料結(jié)果如下:
　　(1)利用HPLC-DAD-MS2定

3、性定量分析了蓓蕾，HSY-4和日本-5不同品種的藍(lán)果忍冬果實花青素成分，在525nm波長檢測到8種花青素成分，其中蓓蕾的花青素含量最高，達(dá)到500.14±62.43mg/100g FW，日本-5最低，為162.79±3.75 mg/100g FW，8種花青素中矢車菊3-O-葡萄糖苷含量最高，約占總花青素的76.61-86.67％。
　　(2)對3個品種的藍(lán)果忍冬成熟期果實做了抗氧化性分析(DPPH，F(xiàn)RAP，TPC，SOD)，分析

4、結(jié)果均表明蓓蕾的抗氧化活性最高，日本-5的抗氧化活性最低，果實總花青素含量與果實抗氧化性呈正相關(guān)，花青素含量越高，果實抗氧化活性越強。
　　(3)利用Illumina HiSeqTM2000平臺對蓓蕾果實綠熟期和轉(zhuǎn)色期兩個時期進(jìn)行de novo轉(zhuǎn)錄組測序，總共組裝得到66，610條All-Unigenes，通過與網(wǎng)上可用的公共數(shù)據(jù)庫(NR，Swiss-prot，KEGG，COG和GO)比對注釋，43，202 All-unigene

5、s(64.86％)與已知蛋白顯示高度的相似性。
　　(4)利用熒光定量PCR技術(shù)對蓓蕾品種的幼果期，綠熟期，半轉(zhuǎn)色期，轉(zhuǎn)色期，軟化期5個時期進(jìn)行花青素合成相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量分析，結(jié)果表明在5個時期中，半轉(zhuǎn)色期花青素合成基因表達(dá)量最高，與花青素積累過程相符，PAL，ANS，bHLH基因表達(dá)豐度最高，在花青素合成過程中起關(guān)鍵作用。
　　(5)利用熒光定量PCR技術(shù)對3個藍(lán)果忍冬品種的綠熟期和轉(zhuǎn)色期進(jìn)行花青素合成相關(guān)基因表