噻吩衍生物類基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的合成及初步活性.pdf

1、基質(zhì)金屬蛋白酶是一類含鋅的蛋白水解酶，屬金屬內(nèi)肽酶家族，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解、組織重建以及細(xì)胞內(nèi)多種可溶性因子的調(diào)控起重要作用，其活性可由內(nèi)源性金屬蛋白酶抑制劑調(diào)控，其間微妙平衡在許多病理?xiàng)l件下被打破，如腫瘤、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等?；|(zhì)金屬蛋白酶己被證明在腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和癌組織血管生長(zhǎng)中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，與浸潤(rùn)性腫瘤的惡性表達(dá)及癌癥病人的不良預(yù)后密切相關(guān)，抑制該酶活性可以有效地控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。因此，基質(zhì)金屬

2、蛋白酶已成為腫瘤藥物研究和開(kāi)發(fā)中極其重要的靶點(diǎn)，其中，尤以氨肽酶和明膠酶與惡性腫瘤最為相關(guān)，針對(duì)這些靶點(diǎn)設(shè)計(jì)并合成的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑類抗腫瘤藥物，是當(dāng)前抗腫瘤藥物研究的一個(gè)熱點(diǎn)。 基于已知基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的三維結(jié)構(gòu)及其與酶的結(jié)合模型，設(shè)計(jì)、合成了兩個(gè)系列噻吩希夫堿類化合物：噻吩衍生物類苯胺希夫堿和噻吩衍生物類氨基酸希夫堿，并進(jìn)行了初步的抑酶試驗(yàn)和鋅離子螯合能力測(cè)試。 一、化合物的合成：本研究以噻吩為主要原料，

3、在正丁基鋰作用下與DMF在-78℃無(wú)水無(wú)氧條件下反應(yīng)得到噻吩二甲醛，噻吩二甲醛再分別與苯胺和氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，得到噻吩衍生物類苯胺希夫堿和噻吩衍生物類氨基酸希夫堿。經(jīng)過(guò)紅外和核磁表征證明得到了目標(biāo)產(chǎn)物。 一、體外酶抑制性試驗(yàn)：在抑制氨肽酶活性試驗(yàn)中，以L—亮氨酸—對(duì)硝基苯胺為底物，測(cè)定化合物對(duì)氨肽酶的抑制活性；在抑制明膠酶(MMP-2，9)活性試驗(yàn)中，以琥珀酰明膠為底物，2,4，6—三硝基苯磺酸為顯色劑，測(cè)定化合物對(duì)明膠酶活性的

4、影響，試驗(yàn)結(jié)果證明：本文設(shè)計(jì)合成的部分化合物具有一定的抑制明膠酶的活性。 三、鋅離子螯合能力測(cè)試：由于氨肽酶N和明膠酶都是鋅離子酶，在活性中心的2n2+離子對(duì)酶的活性有著重要作用，人們預(yù)測(cè)化合物與酶的作用機(jī)制是通過(guò)與酶中心的Zn2+離子螯合，所以為了驗(yàn)證化合物與酶作用機(jī)理，我們?nèi)∧繕?biāo)化合物中有代表性的一部分，在模擬生理pH的緩沖體系中與含有金屬鋅離子的溶液混合均勻，比較混合前后熒光光譜的變化，定性地說(shuō)明目標(biāo)化合物是否與金屬鋅離

5、子發(fā)生了螯合，以及與金屬鋅離子螯合的能力，從而證明化合物與酶作用是否與Zn2+螯合相關(guān)。 綜合以上結(jié)果，結(jié)合構(gòu)效關(guān)系分析，表明結(jié)構(gòu)中含有羥基或羧基的的化合物活性明顯高于其它化合物。 本文所設(shè)計(jì)、合成的噻吩希夫堿類基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的結(jié)構(gòu)與酶的活性中心相匹配，在體外對(duì)兩類金屬蛋白酶都表現(xiàn)出較好的抑制活性，體外初步活性試驗(yàn)結(jié)果表明化合物的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用是通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性而實(shí)現(xiàn)的。到目前為止，本實(shí)驗(yàn)對(duì)目標(biāo)化合