產(chǎn)蛋白酶菌株HW08的鑒定及其所產(chǎn)胞外低溫堿性蛋白酶Ps5的性質(zhì)研究.pdf

1、從我國(guó)黃海底泥中分離得到一株產(chǎn)低溫堿性蛋白酶的適冷菌,編號(hào)為HW08。通過(guò)對(duì)其進(jìn)行形態(tài)特征觀察,生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定以及16S rDNA.序列比對(duì)的研究,我們確定其為Pseudomonas lundensis種的成員。研究表明,該菌株為革蘭氏陰性桿菌,寬1 μm,長(zhǎng)3.5 μm,可借助一極生鞭毛運(yùn)動(dòng),不產(chǎn)孢子,在紫外線的照射下菌落呈淡綠色。生長(zhǎng)溫度為4-33℃,最優(yōu)生長(zhǎng)溫度為25℃。有氧代謝而不進(jìn)行無(wú)氧發(fā)酵。
　　 HW08菌分泌一

2、種胞外的堿性低溫蛋白酶,在經(jīng)過(guò)發(fā)酵液離心,硫酸銨沉淀,超濾濃縮,凝膠過(guò)濾后,得到了電泳級(jí)純的胞外蛋白酶,命名為Ps5。該酶的最適作用溫度為30℃,最適pH為10.4。Ps5為金屬蛋白酶(其活性受EDTA顯著抑制),聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示,它的分子量為46KDa。
　　 由Ps5最適溫度為30℃,在0℃時(shí)還保持20％的活性可知,它屬于一種低溫酶。作為一種低溫酶,Ps5在4℃保存60天,或經(jīng)歷反復(fù)的凍融(至少4次)后,活性沒(méi)有明顯的

3、下降。在5 mM Ca2+存在的條件下,該酶顯示出了較廣泛的溫度穩(wěn)定性(25-40℃)和pH穩(wěn)定性(7.0-11.0)。并且,該蛋白酶對(duì)洗滌添加劑,如非離子表面活性劑和漂白劑有一定的耐受性。這些特點(diǎn)使Ps5在工業(yè)應(yīng)用中表現(xiàn)出一定的潛力。
　　 另外,在研究金屬離子對(duì)酶的影響時(shí)我們發(fā)現(xiàn),與大多金屬蛋白酶不同的是:Ps5的活性受到Zn2+、Ca2+的抑制,而不是被它們的激活。結(jié)合Ps5較顯著的穩(wěn)定性(尤其在Ca2+存在時(shí)),我們推測(cè)