章魚腸道產蛋白酶菌分離及酶學性質研究.pdf

1、OdngdaoAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterIsolationofaProteaseProducingBacteriafromTractofOctopusvulgarisandEnzymaticPropertiesResearchGraduatewithProfessionalMasterDegree：FoodEngineeringMentor：PiaoMeiziS

2、econdMentor：TypeofProfessionalDegree：MasterofEngineeringAcademicfield：FoodEngineering章魚腸道產蛋白酶菌分離及酶學性質研究摘要通過透明圈法和酶活性測定，從章魚(Octopusvulgaris)胃腸道中篩選獲得一株高產酶活性菌株，命名為L2，結合生理生化特征與16SrDNA序列分析法，鑒定該菌株為交替假單胞菌(Pseudoalteromonasokeano

3、koiteso研究了菌株的最適發(fā)酵條件，考察了碳源、氮源、發(fā)酵時間、培養(yǎng)溫度、起始pH值等因素對菌株產蛋白酶的影響。同時利用硫酸銨沉淀、透析和濃縮、離子交換層析、凝膠層析等方法分離出一種電泳級蛋白酶純品，并對其酶學性質進行了研究，包括蛋白酶的分子量、最適作用溫度、最適作用pH值、熱穩(wěn)定性、金屬離子及抑制劑等性質。結果顯示：1經(jīng)分離篩選獲得產蛋白酶活性最高的菌株L2，采用生理生化結合16SrDNA序列分析方法鑒定其屬于細菌(Bacteri

4、a)域，厚壁菌(Firmicutes)門，桿菌(Bacilli)綱，芽孢桿菌(Bacillales)目，球菌(Planococcaceae)科，動性桿菌(Planomicrobium)屬。2L2菌株在以0。5％淀粉為碳源，05％蛋白胨為氮源，培養(yǎng)基初始pH80，培養(yǎng)溫度19。C的條件下180rpm振蕩培養(yǎng)35d時，所產蛋白酶活性最高，培養(yǎng)基中添加聚乙二醇和吐溫80對茵株產蛋白酶有抑制作用。L2所產蛋白酶在SDSPAGE電泳上顯示主要有4

5、種蛋白酶，分子量分別為1449、1086、840和614kDa，蛋白酶的最適作用溫度為40。C，pH對蛋白酶性質影響不明顯，熱穩(wěn)定性較好；Ba2、Ca2、Fe2對蛋白酶有一定的激活作用；金屬蛋白酶4‘e4劑(EDTA)和絲氨酸蛋白酶抑制劑(PMSF)對蛋白酶均有顯著抑制作用，說明粗酶液中既存在金屬蛋白酶也存在絲氨酸蛋白酶。3粗酶液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析和濃縮、DEAESephadexA50陰離子層析、SephadexG一100凝膠層析進行分