堿性蛋白酶產(chǎn)生菌株Aeromonas CYL-7的選育及產(chǎn)酶研究.pdf

1、本文從煙臺近岸的海水中篩選獲得一株產(chǎn)堿性蛋白酶的細(xì)菌，經(jīng)鑒定屬于氣單胞菌屬(Aeromonas)。該菌能在4～45℃范圍內(nèi)生長，生長的pH范圍為pH7.0-10.0，菌的生長不需要海水或NaCl，但0.2～1.0％的NaCl對其生長、產(chǎn)酶有利。 通過對初篩菌株進(jìn)行紫外誘變和EMS化學(xué)誘變，結(jié)合利福平抗性菌株的篩選，最后得到突變菌株AeromonasCYL-7。 初步探討了菌株CYL-7產(chǎn)堿性蛋白酶的誘導(dǎo)性及酶的分泌性，以

2、此為基礎(chǔ)，采用了不同營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，并實(shí)驗(yàn)了幾種對產(chǎn)酶有促進(jìn)作用的誘導(dǎo)物質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株CYL-7只能利用有機(jī)氮源產(chǎn)酶，適當(dāng)添加誘導(dǎo)物利于產(chǎn)酶；所產(chǎn)蛋白酶為胞外酶，酶合成模式屬于滯后合成型，大量收獲在菌體生長的穩(wěn)定期。 通過正交實(shí)驗(yàn)確定發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組成：4.0％玉米粉、2.0％麩皮、0.5％葡萄糖、1.5％豆餅粉堿水解液、0.5％酪蛋白、0.5％氯化鈉、0.1％氯化鈣、0.1％氯化錳、0.4％磷酸氫二鈉、0.03％磷酸二氫

3、鉀；確定最適發(fā)酵條件為：起始pH8.5、培養(yǎng)溫度30℃、種齡12h、接種量4％、300ml三角瓶中裝入50ml發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶轉(zhuǎn)速160rpm，發(fā)酵時(shí)間48-72h。綜合最佳的培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件，最終堿性蛋白酶活達(dá)7800U/mL。 該酶作用的最適pH為10.0，pH8.0～12.0的范圍內(nèi)較穩(wěn)定；pH10.0保溫60min酶活力維持在80％以上。最適溫度為60℃，在55℃以下范圍內(nèi)，該酶具有良好的穩(wěn)定性；70℃處理40min