一株產(chǎn)低溫堿性蛋白酶海洋菌的篩選與發(fā)酵.pdf

1、蛋白酶是催化蛋白質(zhì)水解的一類酶，該酶催化反應(yīng)速度較快，無工業(yè)污染，被廣泛地應(yīng)用于皮革脫毛、飲品澄清、洗滌劑、化妝品以及醫(yī)藥治療等行業(yè)。蛋白酶廣泛存在于動物內(nèi)臟、植物莖葉、果實和微生物中。由于動植物資源有限，工業(yè)上生產(chǎn)蛋白酶制劑主要利用微生物發(fā)酵制備，目前工業(yè)生產(chǎn)所用菌株主要為霉菌、細(xì)菌及少數(shù)酵母、放線菌。海洋微生物具有獨特的生理特征，如:耐鹽、耐高壓、嗜低溫等，因此海洋微生物將成為獲取新的生物活性物質(zhì)的重要來源。所以從海洋微生物中篩選蛋

2、白酶的新型高產(chǎn)菌種非常具有實際意義。
　　本文系統(tǒng)的介紹了一株新型蛋白酶菌株的篩選，鑒定，發(fā)酵條件優(yōu)化，產(chǎn)物提純，產(chǎn)物性質(zhì)測定等實驗過程并對其中遇到的問題進(jìn)行了說明。菌種篩選的海水樣品取自秦皇島近海，經(jīng)過初篩和復(fù)篩確定一株產(chǎn)蛋白酶能力最強的菌株，編號為D5。對D5進(jìn)行16S rDNA測序分析及生理生化鑒定確定其屬于假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas sp.)。而后進(jìn)行了D5菌培養(yǎng)基的單因素試驗，確定了較為適宜菌株產(chǎn)

3、酶的碳源，氮源，無機鹽的種類。最終確定培養(yǎng)基為：蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、葡萄糖5g/L、硝酸銨0.8g/L、三氯化鐵0.2g/L、氯化錳0.2g/L、氯化鎂0.2g/L、氯化鈣0.2g/L；發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度30oC、發(fā)酵時間24小時，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min。在此條件下進(jìn)行發(fā)酵發(fā)酵液酶活可達(dá)1140U/ml。隨后分別用鹽析，層析等方法對發(fā)酵液中的蛋白酶進(jìn)行了純化。經(jīng)過分離純化，D5菌蛋白酶比活由初始的65.23U/mg提高