金橙黃微小桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本研究室以往從腐敗的堿性硅溶膠中分離出一株金橙黃微小桿菌EX0。本研究對(duì)該菌株產(chǎn)生堿性蛋白酶的能力、產(chǎn)酶條件、及其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究,為探索新的堿性蛋白酶來(lái)源及其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供了依據(jù)。
　　利用酪蛋白培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)該菌株有水解酪蛋白的能力,表明其有產(chǎn)生蛋白酶的能力,產(chǎn)量為13.361U/mL。之后采用了單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)的方法,對(duì)金橙黃微小桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶條件進(jìn)行優(yōu)化,以及福林法測(cè)定不同條件下堿性蛋白酶活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示培

2、養(yǎng)基最佳組成成分為酵母膏10g/L,玉米粉10g/L，NaCl5g/L,最優(yōu)發(fā)酵條件為碳氮比為1:1,溫度為25℃,培養(yǎng)時(shí)間21h,最佳接種量為8％,最佳培養(yǎng)基初始pH為8.8。優(yōu)化后其產(chǎn)酶量能夠達(dá)到37.793U/mL。
　　該實(shí)驗(yàn)利用不同飽和度的硫酸銨進(jìn)行沉淀,得到最佳的硫酸銨飽和度為50%。將濃縮后的酶液通過(guò)葡聚糖凝膠層析,經(jīng)分離純化后,金橙黃微小桿菌分泌的堿性蛋白酶分子量大小約42KDa,不同濃度的EDTA和β-巰基乙醇均

3、對(duì)該蛋白酶有不同程度的抑制作用,EDTA對(duì)蛋白酶的抑制作用,說(shuō)明該酶可能含有金屬離子。該酶反應(yīng)的最適溫度為50℃,反應(yīng)的最適pH為8.0。金屬離子如Cu2+、Zn2+、Mn2+,對(duì)酶活性表現(xiàn)出強(qiáng)烈抑制作用,Mg2+對(duì)酶表現(xiàn)出一定的激活作用。
　　近年來(lái)對(duì)堿性蛋白酶的研究主要來(lái)源于地衣芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌等芽孢桿菌屬,對(duì)于其他種屬的微生物是否能夠產(chǎn)生具有工業(yè)價(jià)值的堿性蛋白酶還有待進(jìn)一步探索。腐敗的堿性硅溶膠中營(yíng)養(yǎng)成分不高,且屬于高