在全基因組水平上分析t(8;21)型白血病中常見融合蛋白AML1-ETO的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制.pdf

1、染色體易位常見于白血病中，其中在急性髓系白血?。ˋML）中有12-15％的病人發(fā)生t(8;21)(q22;q22)染色體易位。由該易位產(chǎn)生的異常融合蛋白AML1-ETO 既能識別AML1 核心序列TGT/cGGT，又能異常招募轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物，是t(8;21)型白血病發(fā)病的主要因素。
　　 本研究將染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)技術(shù)和高通量的測序技術(shù)結(jié)合，在含有t(8;2

2、1)易位的AML 病人來源的Kasumi-1 細(xì)胞株中開展研究。我們利用生物信息學(xué)方法分析AML1-ETO在全基因組上的結(jié)合位點(diǎn)，基因結(jié)構(gòu)分析顯示AML1-ETO 傾向于結(jié)合在近端啟動子和上游增強(qiáng)子區(qū)，motif 分析顯示AML1 的結(jié)合位點(diǎn)顯著性富集。而ChIP 實(shí)驗(yàn)表明AML1 和AML1-ETO 富集片段的重合率高達(dá)80％，這說明AML1-ETO 和AML1 基本占據(jù)基因組內(nèi)相同的位置，它們有可能通過相互作用共同調(diào)控一些靶基因的轉(zhuǎn)

3、錄活性。接下來我們通過下游實(shí)驗(yàn)證實(shí)AML1-ETO 和AML1 之間確實(shí)存在直接相互作用，其相互作用的結(jié)構(gòu)域均為各自的Runt homology domain (RHD)。進(jìn)一步以腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因CST7 為例，利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)初步探索了AML1-ETO 和AML1 調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)在AML1 存在的情況下AML1-ETO 對該基因啟動子活性的抑制作用更加強(qiáng)烈。最后我們結(jié)合RNA 干擾技術(shù)和表達(dá)譜芯片技術(shù)在Kasum