2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   探討整合素αvβ6在胃癌AGS細胞增殖、凋亡和化療耐藥等惡性生物學行為中的作用及相關機制。
   方法
   實驗分兩部分。
   第一部分,培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長期后分3組處理。對照組:不做特殊處理;10D5組:收集細胞重懸于RPMI1640中,向細胞懸液加入αvβ6單克隆抗體10D5,使其終濃度為0.1mg/mL,冰浴30min使其充分作用后置培養(yǎng)箱培養(yǎng)6h,PBS清洗終止反應;IgG2a組

2、:用10D5陰性對照劑鼠IgG2a以相同濃度處理,方法同10D5組。MTT法檢測細胞增殖,流式細胞儀檢測細胞凋亡,Western blotting檢測caspase-3蛋白的表達情況以研究整合素αvβ6在胃癌AGS細胞增殖和凋亡中的作用。
   第二部分,培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長期后分4組處理。對照組:細胞貼壁后(6h)換液,加入含特定濃度5-FU的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;10D5組:向細胞懸液加入10D5,使其終濃度為0.1mg/mL,冰

3、浴30min使其充分作用后置培養(yǎng)箱培養(yǎng)6h,換液加入含特定濃度5-FU的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;IgG2a組:加入10D5對照劑IgG2a后用5-FU處理,試劑濃度和方法同10D5組:PD98059組:細胞貼壁后(6h)換液,加入含5-FU和終濃度為20μmol/LPD98059的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h。MTT法檢測細胞增殖,流式細胞儀檢測細胞凋亡,Western blotting檢測Bcl-2和caspase-3蛋白的表達情況以研究αvβ6是否可

4、介導胃癌AGS細胞對5-FU的耐受及β6-ERK直接通路在其中的作用。其中,MTT選取5-FU濃度為0.5mmol/L,流式和Western blotting選取5-FU濃度為0.2mmol/L。統(tǒng)計方法采用單因素方差分析和LSD檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
   結果
   第一部分:
   1.經(jīng)MTT法檢測,用10D5封閉αvβ6后,細胞的存活率下降至(73.74±1.7)%(P<0.05),而

5、IgG2a處理組(99.4±2.9)%與對照組相比無明顯差異(P>O.05)。
   2.用流式細胞儀檢測各組細胞并用WinMD12.9軟件分析得出,對照組、10D5組、IgG2a組的凋亡率分別為(1.93±0.09)%、(11.82±0.45)%、(2.06±0.04)%。10D5組細胞的凋亡率與對照組相比明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);IgG2a組和對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   3.經(jīng)半

6、定量光密度分析,caspase-3表達水平組間差異有統(tǒng)計學意義,10D5組表達水平大于對照組P(0.05)。IgG2a組與對照組相比,caspase-3表達水平無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   第二部分,
   1.5-FU毒性檢測:用含5-FU濃度為0.005、0.05、0.5、5mmol/L的培養(yǎng)基孵育24小時后,胃癌AGS細胞抑制率分別為(17.31±0.78)%、(19.55±0.64)%、(47.56±3.

7、23)%、(80.87±3.4)%。
   2.經(jīng)MTT法檢測,對照組、10D5組、IgG2a組、PD98059組的抑制率分別為(28.11±2.7)%、(84.49±1.6)%、(31.44±5.2)%、(86.72±5.2)%。10D5組、PD98059組的抑制率均明顯大于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);IgG2a組和對照組相比無顯著差異(P>0.05)。
   3.用流式細胞儀檢測各組細胞并用WinMD1

8、2.9軟件分析得出,對照組、10D5組、IgG2a組、PD98059組的凋亡率分別為(6.63±1.4)%、(30.55±2.4)%、(8.13±1.3)%、(35.99±4.0)%。10D5組、PD98059組的凋亡率與對照組相比均明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);IgG2a組和對照組相比無顯著差異(P>0.05)。
   4.經(jīng)半定量光密度分析,10D5組、PD98059組的caspase-3表達水平均大于對照組(

9、P<0.05),而Bcl-2表達水平小于后者(P<0.05);IgG2a組與對照組相比,caspase-3和Bcl-2表達水平無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   結論及意義
   1.胃癌AGS細胞表面的αvβ6被特異性抗體封閉后,細胞增殖減慢,凋亡增加,caspase-3表達水平上調(diào)。表明αvβ6在AGS細胞增殖和抗凋亡過程中發(fā)揮作用。
   2.胃癌AGS細胞表面的αvβ6被特異性抗體封閉后冉用5-FU誘導

10、細胞凋亡,與對照組及鼠IgG2a組相比,細胞的增殖減慢,凋亡增加,caspase-3表達水平上調(diào)而Bcl-2表達水平下調(diào)。表明αvβ6可通過上調(diào)Bcl-2表達抑制5-FU誘導的胃癌細胞凋亡,促進細胞增殖,介導細胞對5-FU耐受的產(chǎn)生。
   3.用PD98059阻斷ERK功能后,胃癌AGS細胞的增殖減慢,凋亡增加,caspase-3的表達水平上調(diào)而Bcl-2表達水平下調(diào),表明PD98059消除了αvβ6介導的胃癌細胞對5-FU的

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