2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究首次探討TIPE3對胰腺導管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)增殖、侵襲、轉移的影響,有助于深入理解PDAC惡性進展的分子生物學機制。本研究初步探討胰腺癌細胞中TIPE3和MMP-9基因表達,以及在該過程中二者的關系,是否協(xié)同參與以及在胰腺癌侵襲、轉移過程中各自的作用。
  本文主要從以下幾方面進行論述:
  第一部分 TIPE3蛋白在PDAC中的表達及臨床病理學意義

2、r>  目的:
  分析PDAC組織與癌旁正常組織標本中TIPE3蛋白的表達情況,并結合患者的臨床病理資料分析TIPE3蛋白在PDAC中的表達特征,探討其在PDAC發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。
  方法:
  應用免疫組化2-step plus(@)法分別檢測78例PDAC及78例相應癌旁組織中TIPE3蛋白的表達情況,觀察其與患者臨床病理參數(shù)之間的關系,采用SPSS計算機統(tǒng)計軟件分析腫瘤及癌旁正常組織中TIPE3蛋白的表

3、達差異,并結合臨床病理特征分析TIPE3蛋白的表達與病人年齡、性別、腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結轉移及遠處轉移的關系。
  結果:
  TIPE3蛋白在PDAC組織中的表達顯著高于相應癌旁正常組織,差異具統(tǒng)計學意義;TIPE3蛋白在不同年齡、性別患者的PDAC組織中表達差異無統(tǒng)計學差異;TIPE3蛋白在Ⅰ、Ⅱ期PDAC組織中的表達顯著低于Ⅲ、Ⅳ期PDAC組織,在無淋巴結轉移的PDAC組織中表達顯著低于有淋巴轉移的PDAC組

4、織,差異有統(tǒng)計學意義。
  結論:
  1、PDAC組織TIPE3蛋白表達水平顯著高于相應癌旁正常組織,且與PDAC淋巴轉移、TNM分期相關;
  2、提示TIPE3可能參與了PDAC的發(fā)生、發(fā)展過程。
  3、進一步基因水平的研究有助于尋找PDAC更佳的診斷和治療方法。
  第二部分 TIPE3對PDAC細胞增值、侵襲及轉移的影響
  目的:
  探討TIPE3對PDAC細胞增值、侵襲及轉移在

5、mRNA和蛋白質水平上表達的影響。
  方法:
  1、首先用quantitative Real-time PCR技術在8種胰腺癌細胞株中篩選出TIPE3高表達細胞株和低表達細胞株,為后續(xù)實驗做好準備;
  2、quantitative Real-time PCR技術檢測在mRNA水平上TIPE3的表達效果;
  3、western blot實驗檢測在蛋白質水平上TIPE3的表達效果;
  4、CCK8實驗

6、檢測對PDAC細胞增殖能力的影響;
  5、Transwell實驗檢測對PDAC細胞遷移能力及侵襲能力的影響;
  結果:
  1、TIPE3在胰腺癌細胞系PANC-1、Capan-1、CFPAC-1及AsPC-1中的表達檢測
  通過quantitative Real-time PCR技術檢測8種胰腺癌細胞系中TIPE3的表達情況,選取TIPE3表達最高的兩種細胞系PANC-1及Capan-1和TIPE3表達最

7、低的兩種細胞系CFPAC-1及AsPC-1,為后續(xù)TIPE3高表達胰腺癌細胞系和TIPE3低表達細胞系分別進行TIPE3干擾實驗TIPE3過表達實驗做準備。
  2、在高表達TIPE3的胰腺癌細胞PANC-1及Capan-1中干擾TIPE3的表達,可顯著抑制腫瘤細胞的惡性生物學行為。
  干擾TIPE3后,quantitative Real-time PCR技術檢測在mRNA水平上TIPE3的表達效果,與正常胰腺細胞相比,可

8、見胰腺癌細胞TIPE3表達明顯減少;而干擾TIPE3后,western blot實驗檢測在蛋白質水平上TIPE3的表達效果,與正常胰腺細胞相比,可見胰腺癌細胞T1PE3表達明顯減少。此兩項實驗從mRNA水平和蛋白質水平上均驗證了干擾TIPE3后,均可明顯降低胰腺癌細胞TIPE3的表達水平。干擾TIPE3后,CCK8實驗檢測對PANC-1細胞和Capan-1細胞增殖能力的影響,結果表明,與正常胰腺細胞相比較,干擾TIPE3可顯著抑制PAN

9、C-1細胞和Capan-1細胞的增殖能力。干擾TIPE3后,Transwell實驗檢測對PANC-1細胞和Capan-1細胞遷移能力及侵襲能力的影響,結果表明,與正常胰腺細胞相比較, PANC-1細胞和Capan-1細胞的遷移及侵襲能力明顯減弱。
  3、在低表達TIPE3的胰腺癌細胞CFPAC-1及AsPC-1中過表達TIPE3,可顯著促進腫瘤細胞的惡行生物學行為。
  過表達TIPE3后, quantitative Re

10、al-time PCR技術檢測在mRNA水平上TIPE3的表達效果,與正常胰腺細胞相比,胰腺癌細胞TIPE3表達顯著增加;而過表達TIPE3后, western blot實驗檢測在蛋白質水平上TIPE3的表達效果,與正常胰腺細胞相比,胰腺癌細胞TIPE3表達明顯增加。過表達TIPE3后,CCK8實驗檢測對CFPAC-1細胞和Capan-1細胞增殖能力的影響,結果表明,與正常胰腺細胞相比較,過表達TIPE3可顯著增加CFPAC-1細胞和A

11、sPC-1細胞的增殖能力。過表達TIPE3后,Transwell實驗檢測對CFPAC-1細胞和AsPC-1細胞遷移能力及侵襲能力的影響,結果表明,與正常胰腺細胞相比較,過表達TIPE3后CFPAC-1細胞和AsPC-1細胞的遷移及侵襲能力明顯增強。
  結論:
  本部分旨在研究TIPE3對PDAC細胞增值、侵襲及轉移在mRNA和蛋白質水平上表達的影響,首先通過quantitative Real-time PCR技術在8種胰

12、腺癌細胞系中選取TIPE3表達最高的兩種細胞系PANC-1及Capan-1進行TIPE3干擾實驗,TIPE3表達最低的兩種細胞系CFPAC-1及AsPC-1進行TIPE3過表達實驗。然后通過CCK8實驗、Transwell實驗、quantitative Real-time PCR技術及western blot實驗等四種方法分別進行檢驗TIPE3對PDAC細胞增值、侵襲及轉移在mRNA和蛋白水平上的干擾和過表達效果。本部分結果顯示,TIP

13、E3可明顯促進PDAC細胞增值、侵襲及轉移,進一步豐富了TIPE3的理論知識,并為下一步研究TIPE3調(diào)控PDAC細胞惡性生物學行為的分子機制奠定了基礎。
  第三部分 TIPE3和MMP-9在PDAC細胞中表達的相關性研究
  目的:
  探討TIPE3和MMP-9在PDAC細胞中表達相關性,初步探討TIPE3調(diào)控PDAC細胞惡性生物學行為的分子機制。
  方法:
  1.real-time PCR檢測在

14、mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況;
  2.ELISA檢測蛋白質水平細胞培養(yǎng)上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況。
  結果:
  1、TIPE3在mRNA水平顯著上調(diào)MMP-9表達。
  在高表達TIPE3的胰腺癌細胞系PANC-1細胞和Capan-1細胞中,干擾TIPE3表達后,real-time PCR檢測在mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況,

15、結果表明,相比較正常胰腺細胞,干擾TIPE3表達可明顯抑制MMP-9的表達水平;在低表達TIPE3的胰腺癌細胞系CFPAC-1細胞和AsPC-1細胞中,過表達TIPE3后,real-time PCR檢測在mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況,結果表明,與正常胰腺細胞相比較,過表達TIPE3可顯著增加MMP-9的表達水平。
  2、TIPE3在蛋白質水平明顯上調(diào)MMP-9表達。
  在高表達TIPE3胰腺

16、癌細胞系PANC-1細胞和Capan-1細胞中,干擾TIPE3表達后,ELISA檢測蛋白質水平細胞培養(yǎng)上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況,結果表明,與正常胰腺細胞比較,干擾TIPE3表達后,可顯著抑制MMP-9蛋白的表達水平;在低表達TIPE3胰腺癌細胞系CFPAC-1細胞和AsPC-1細胞中,過表達TIPE3后,ELISA檢測蛋白質水平細胞培養(yǎng)上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的變化情況,結果表明,與正常胰腺細胞

17、比較,過表達TIPE3后,可明顯增加MMP-9蛋白的表達水平。
  結論:
  本部分研究認為在胰腺癌細胞中,TIPE3可顯著增強MMP-9活性,同時,MMP-9蛋白水解細胞外基質會使TIPE3釋放入腫瘤侵入組織的接觸點。因此,在胰腺癌細胞中,TIPE3增加MMP-9的活性可能對腫瘤的侵襲形成正反饋。TIPE3也可能通過加強MMP-9活性,增加MMP-9對細胞外基質的降解。TIPE3與MMP-9之間的相互作用可能在胰腺癌細胞

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