蛙皮素防治小腸移植術(shù)后細(xì)菌移位的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來，隨著小腸移植技術(shù)和免疫抑制以及術(shù)后的治療手段的不斷提高，在一些小腸移植中心的小腸移植5年成活率已接近70％。小腸移植也逐漸成為一種治療不可逆腸衰竭如短腸綜合征的有效的治療方法。在小腸移植(smallboweltransplantation，SBT)中，缺血再灌注損傷、排斥反應(yīng)等嚴(yán)重?fù)p傷了移植腸黏膜，使移植腸黏膜的結(jié)構(gòu)和功能遭受嚴(yán)重破壞；同時(shí)移植腸的功能嚴(yán)重受損，加上腸腔的有菌環(huán)境使小腸移植術(shù)后移植腸細(xì)菌移位率明顯增加，造成受體高

2、感染率。小腸移植術(shù)后的高感染率一直困擾著大家，是影響移植腸和受體存活的重要因素，也是影響小腸移植臨床開展的重要原因。因此，如何有效降低小腸移植術(shù)后移植腸細(xì)菌移位率是當(dāng)今小腸移植研究領(lǐng)域的重要課題。目前降低小腸移植術(shù)后細(xì)菌移位的主要方法有：選擇性腸道去污、小腸移植術(shù)后應(yīng)用谷胺酰胺、表皮生長(zhǎng)因子等。但是谷胺酰胺、表皮生長(zhǎng)因子有增加排斥反應(yīng)的可能性，選擇性腸道去污目前仍然存在爭(zhēng)論。蛙皮素(BBS)是一種與胃泌素釋放肽和胃腸神經(jīng)肽形態(tài)和功能都十

3、分相似的14肽，分子量為1619D；具有促進(jìn)損傷后腸黏膜形態(tài)和免疫的修復(fù)作用。本實(shí)驗(yàn)在建立改良大鼠小腸移植的動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，通過觀察BBS對(duì)SBT術(shù)后腸黏膜絨毛結(jié)構(gòu)、腸道黏膜免疫損傷的修復(fù)，細(xì)菌移位率，血漿內(nèi)毒素水平，死亡率的影響探討B(tài)BS防治大鼠小腸移植術(shù)后移植腸細(xì)菌移位的作用及其可能的機(jī)制。 方法：1.建立改良大鼠小腸移植的動(dòng)物模型SD清潔級(jí)大鼠92只建立46只大鼠小腸移植動(dòng)物模型，按移植腸不同處理情況分為兩組：雙造瘺組：

4、血管吻合完畢后經(jīng)典的移植腸T-V式雙造瘺(n=2×23)。單造瘺組：血管吻合完畢后移植腸近端結(jié)扎，遠(yuǎn)端造瘺(n=2×23)。觀察術(shù)后7天內(nèi)死亡率，術(shù)后第7天處死取病理。2.BBS對(duì)大鼠節(jié)段性小腸移植術(shù)后移植腸細(xì)菌移位的影響及其可能機(jī)制；SD清潔級(jí)大鼠130只移植術(shù)后不同處理情況分為三組：1)正常對(duì)照組(假手術(shù)組，n=10)行虛擬手術(shù)。2)BBS組(BBS+FK506組,n=2×30)小腸移植術(shù)后皮下注射BBS(10ug/kg/day)，

5、肌肉注射FK5060.5mg/kg/day。3)移植對(duì)照組(生理鹽水+FK506組,n=2×30)小腸移植術(shù)后皮下注射生理鹽水1.5ml,肌肉注射FK506(0.5mg/kg/day)。術(shù)后每1000ml飲用水16萬U中加入12.5PODs腸造瘺口注射活0.3ml×1×1011/L大腸桿菌；14天剖殺取材。檢測(cè)小腸黏膜固有層PeyerPatches淋巴結(jié)CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+細(xì)胞的含量，肝臟、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率

6、、量，血漿內(nèi)毒素水平以及小腸黏膜形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1.單造瘺組與雙造瘺組4-7天內(nèi)死亡率分別為36.8％和42.1％，比較無明顯差異，P＞0.05。單造瘺組和雙造瘺組在絨毛高度、絨毛厚度、陷窩深度及絨毛面積比較沒有明顯差異P＞0.05。 2.BBS防治SBT術(shù)后腸細(xì)菌移位檢測(cè)結(jié)果(1)腸黏膜檢測(cè)結(jié)果①光學(xué)顯微鏡觀察移植對(duì)照組腸粘膜固有層明顯水腫，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，絨毛頂端上皮下出現(xiàn)囊狀間隙，中央乳糜管擴(kuò)張。上皮細(xì)胞變性、

7、壞死、脫落、固有層裸露。BBS組上述損傷明顯減輕，僅見少數(shù)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，中央乳糜管仍輕度擴(kuò)張，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚完整。正常對(duì)照組偶見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，中央乳糜管無擴(kuò)張，上皮結(jié)構(gòu)完整。②移植腸黏膜各組掃描電子顯微鏡下的病理改變：絨毛不完整，上皮細(xì)胞間隙較假手術(shù)組明顯增寬，可見多處見上皮細(xì)胞脫落，絨毛潰瘍形成，杯狀細(xì)胞文狀緣偶而可見或缺失。BBS組：絨毛欠完整，偶見上皮細(xì)胞脫落，絨毛潰瘍形成，杯狀細(xì)胞文狀緣較稀疏。正常對(duì)照組：絨毛完整，上皮細(xì)胞

8、間隙較窄且均勻一致；杯狀細(xì)胞的文狀緣清晰可見較密集。③圖文分析儀結(jié)果：移植對(duì)照組的絨毛高度、黏膜厚度、陷窩深度、絨毛面積較正常對(duì)照組明顯降低，僅為正常對(duì)照組的50％-60％，比較有顯著性差異，P＜0.05。但是BBS組的絨毛高度、黏膜厚度、陷窩深度、絨毛面積較移植對(duì)照組明顯增加，P＜0.05。 (2)腸黏膜固有層和Peyer斑中CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+細(xì)胞的含量：進(jìn)行小腸移植的兩組的移植腸腸黏膜固有層和Pey

9、er斑中CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+細(xì)胞的含量明顯降低，腸黏膜的免疫系統(tǒng)明顯受損，與假手術(shù)組比較有明顯差異，P＜0.05；但是在兩組進(jìn)行小腸移植的動(dòng)物模型中，應(yīng)用BBS組的移植腸腸黏膜固有層和Peyer斑中CD3+、、CD8+、CD45RA+細(xì)胞的含量明顯高于移植對(duì)照組，P＜0.05。而CD4+細(xì)胞的含量則沒有明顯差異，P＞0.05。表明BBS具有修復(fù)移植腸免疫的作用，但是修復(fù)的主要是代表非特異性免疫的免疫系統(tǒng)而對(duì)特異性

10、免疫則沒有明顯的作用。 (3)肝臟、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率及移位量：在三組動(dòng)物模型中我們發(fā)現(xiàn)BBS組和移植對(duì)照組的平均細(xì)菌移位量和細(xì)菌移位率明顯高于正常對(duì)照組，P＜0.05；兩組移植動(dòng)物模型中，應(yīng)用BBS組的平均細(xì)菌移位量和細(xì)菌移位率明顯低于移植對(duì)照組，P＜0.05。表明BBS具有明顯降低大鼠小腸移植術(shù)后細(xì)菌移位率的作用；而正常對(duì)照組也有一定量的細(xì)菌移位，表明在正常情況下也有一定量的細(xì)菌移位。 7(4)血漿內(nèi)毒素水平：在

11、三組動(dòng)物模型中，進(jìn)行小腸移植的兩組大鼠的血漿內(nèi)毒素的平均含量明顯低于正常對(duì)照組，P＜0.05，有顯著性差異。而兩組進(jìn)行小腸移植的動(dòng)物模型中，應(yīng)用BBS組的大鼠的血漿內(nèi)毒素的平均含量明顯低于移植對(duì)照組，P＜0.05，有顯著性差異。表明BBS有降低小腸移植術(shù)后血漿內(nèi)毒素水平的作用。 (5)BBS對(duì)小腸移植術(shù)后受體死亡率的影響在三組動(dòng)物模型中，正常對(duì)照組沒有死亡；而兩組進(jìn)行小腸移植的動(dòng)物模型死亡率分別為13.3％和46.7％，應(yīng)用BB

12、S組的受體的死亡率明顯低于移植對(duì)照組，P＜0.05，有顯著性差異。表明BBS具有降低大鼠小腸移植術(shù)后死亡率的作用。 結(jié)論：1.近端結(jié)扎，遠(yuǎn)端造瘺的單造瘺動(dòng)物模型是研究小腸移植術(shù)后感染的方便、實(shí)用的動(dòng)物模型。 2.小腸移植術(shù)和免疫抑制劑的應(yīng)用嚴(yán)重?fù)p傷了移植腸腸黏膜的機(jī)械屏障和免疫屏障。 3.BBS能夠通過修復(fù)SBT術(shù)后腸黏膜機(jī)械屏障和免疫屏障的損傷而有效降低細(xì)菌移位率和血漿內(nèi)毒素水平，從而降低受體的死亡率。