不同生長因子對常溫下體外灌流兔腎影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、慢性腎功能衰竭是臨床上常見的多發(fā)病癥，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，腎移植仍是目前治療慢性腎衰的重要方法。臨床上對供腎的需求不斷上升，而目前一方面可供移植的腎臟嚴(yán)重短缺，另一方面由于離體腎臟保存方法的局限，常有供腎的浪費(fèi)。因此，研究、尋找和使用最佳保存方法，以降低移植腎臟的熱缺血損傷，延長離體腎臟保存時間，提高供腎的利用率已成為我們面臨的一項亟待解決的難題。本實(shí)驗(yàn)旨在探討不同濃度不同生長因子對常溫下體外灌流腎臟的影響。 材料和方法

2、 選擇36只健康成年新西蘭白兔，按照灌注液不同，隨機(jī)分為以下6組：無生長因子對照組(A組)、低劑量表皮生長因子組(B組)、高劑量表皮生長因子組(C組)、低劑量肝細(xì)胞生長因子組(D組)、高劑量肝細(xì)胞生長因子組(E組)、小牛血清組(F組)(經(jīng)56℃30min滅活補(bǔ)體)，每組6只腎，1只用來觀測最長保存時間，另外5只用于檢測各項生化指標(biāo)及觀察光鏡下組織學(xué)改變和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)。無菌條件下取其左腎灌流，用等量RPMI164

3、0培養(yǎng)基稀釋的肝素抗凝自體血灌流，不同組加入不同濃度的不同生長因子，于灌流24、48、65小時分別測腎靜脈流出液乳酸脫氫酶(LDH)活性，鈉、鉀濃度，尿β-N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性以監(jiān)測腎功能，并作光鏡下腎組織結(jié)構(gòu)改變和增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的檢測從而了解腎組織形態(tài)學(xué)改變及腎組織損傷程度以評估不同濃度不同生長因子對體外灌流兔腎的影響。 結(jié)果 1.小牛血清組(F組)腎臟灌流保存時間最長，達(dá)80.65小時。

4、 2.無生長因子組(A組)腎靜脈流出液乳酸脫氫酶活性，鉀濃度及尿β-N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶活性隨灌流時間延長顯著增加(P＜0.01)；表皮生長因子(B、C組)兩組上述生化指標(biāo)于24小時后隨灌流時間延長也顯著增加(P＜0.01)，但增加幅度小于A組，其中C組的增加幅度又略低于B組；肝細(xì)胞生長因子(D、E組)兩組24、48小時上述生化指標(biāo)無顯著增加，65小時雖也顯著增加(P＜0.01)，但增加幅度低于A組，也低于B、C兩組，其中E組的增加

5、幅度又略低于D組；F組以上生化指標(biāo)于24、48小時無顯著增加，也于65小時顯著增加(P＜0.01)，但增加幅度低于其它各組。 3.無生長因子組(A組)腎靜脈流出液鈉濃度隨灌流時間延長顯著降低(P＜0.01)；表皮生長因子(B、C組)兩組腎靜脈流出液鈉濃度于24小時后隨灌流時間延長也顯著下降(P＜0.01)，但下降幅度小于A組，其中C組的下降幅度又略低于B組；肝細(xì)胞生長因子(D、E組)兩組24、48小時腎靜脈流出液鈉濃度無顯著下降

6、，65小時雖也顯著下降(P＜0.01)，但下降幅度低于A組，也低于B、C兩組，其中E組的降低幅度又略低于D組；F組腎靜脈流出液鈉濃度24、48小時無顯著下降，也于65小時顯著下降(P＜0.01)，但下降幅度低于其它各組。 4.腎臟灌流24小時光鏡下各組腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，D、E、F組48小時腎組織結(jié)構(gòu)也基本正常；A、B、C組于灌流48小時，D、E、F組于灌流65小時均可見到腎小管上皮細(xì)胞胞漿混濁腫脹；A、B、C組于灌流65小時，

7、可見到腎小管上皮細(xì)胞胞漿中空泡形成。 5.各組灌流24小時，以及D、E、F組48小時細(xì)胞核增殖抗原基本不表達(dá)；A、B、C組灌流48小時以及D、E、F組灌流65小時細(xì)胞核增殖抗原呈輕度表達(dá)；A、B、C組灌流65小時細(xì)胞核增殖抗原表達(dá)明顯。 結(jié)論 1.含有小牛血清的灌流液，用于常溫下離體腎臟灌流保存效果最好，能延緩腎臟功能損傷，顯著延長保存時間，效果優(yōu)于其他各組。 2.肝細(xì)胞生長因子和表皮生長因子對灌流保存腎