新的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因SPARCL1的研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文新的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因SPARCL1的研究姓名：胡涵光申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：鄭樹20100401浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果為了進(jìn)一步明確SPARCLl的分子生物學(xué)功能，我們經(jīng)行了一系列的體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)。包括以下內(nèi)容：1、針對SPARCLl蛋白制備了小鼠單克隆抗體，并證明其具有良好的特異性，能夠用于WesternBlot及免疫組織化學(xué)研究；2、構(gòu)建了SPARCLl原核及真核表達(dá)質(zhì)粒，誘

2、導(dǎo)并純化得到SPARCLl重組蛋白，證明了該基因原核表達(dá)產(chǎn)物為二倍聚合體；3、構(gòu)建了SPARCLl穩(wěn)定表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞系RKOSPARCLl及對照細(xì)胞系RKOpLXSN，在此基礎(chǔ)上研究表明SPARCLl對腫瘤細(xì)胞周期及增殖能力無明顯改變，但可影響腫瘤細(xì)胞分化及顯著降低體內(nèi)外侵襲、轉(zhuǎn)移能力，尤其在裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)該基因高表達(dá)后能顯著降低腫瘤細(xì)胞肝臟轉(zhuǎn)移的能力?；贏ffymetrixU133plus20高通量表達(dá)譜芯片技術(shù)，分別尋找普通

3、培養(yǎng)基及Matrigel基質(zhì)膠培養(yǎng)條件下，RKO細(xì)胞系高表達(dá)SPARCLl基因后的差異表達(dá)基因并采熒光定量RTPCR驗(yàn)證部分差異基因的變化趨勢與基因芯片結(jié)果一致。采用在線分析軟件DAVID對差異基因進(jìn)行GeneOntology分析表明細(xì)胞骨架蛋白、細(xì)胞黏附、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞周期等與腫瘤相關(guān)的GO分類明顯改變。基于KEGGpathway數(shù)據(jù)庫的信號通路分析提示高表達(dá)SPARCLl基因后，RKO細(xì)胞內(nèi)黏附通路、細(xì)胞通訊及ErbB信號通路出現(xiàn)了

4、明顯抑制，且黏附通路在Matrigel培養(yǎng)基下調(diào)明顯而在普通培養(yǎng)基上無變化，提示SPARCLl參與了腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)間的相互作用。采用免疫組織化學(xué)方法對214例結(jié)直腸癌臨床標(biāo)本腸原發(fā)灶經(jīng)行了SPARCLl蛋白表達(dá)情況的檢測，結(jié)合臨床病理資料及隨訪情況分析，發(fā)現(xiàn)該基因在高分化腫瘤中的表達(dá)顯著高于中低分化組(PO05)；在無轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌原發(fā)灶中的表達(dá)高于有轉(zhuǎn)移組(PO05)。生存分析表明在214例結(jié)直腸癌患者中，SPARCLl高表達(dá)與較長生