人乳腺癌熱休克蛋白70-Her-2癌基因蛋白復(fù)合物分離與純化的研究.pdf

1、目的：探討乳腺癌細(xì)胞中熱休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP 70)與Her-2癌基因蛋白復(fù)合物的分離純化方法，并進(jìn)行鑒定分析，建立一個穩(wěn)定、高效的分離、純化技術(shù)平臺，為乳腺癌個體化免疫治療奠定理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：用高表達(dá)原癌基因Her-2的乳腺癌細(xì)胞株SKBR-3作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，并經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測其中Her-2的表達(dá)情況。經(jīng)免疫共沉淀方法檢測細(xì)胞株中HSP70和Her-2癌基因蛋白的存在形式。采用裂解液裂

2、解、超聲破碎、高速離心、ConA Sepharose親和層析結(jié)合ADP agarose親和層析方法，從熱休克(42℃)處理后的人乳腺癌細(xì)胞株SKBR-3中分離純化出HSP70/Her-2癌基因蛋白復(fù)合物，通過SDS-PAGE電泳、Western-blot檢測進(jìn)行蛋白分子量及性質(zhì)鑒定。結(jié)果：原癌基因Her-2在SKBR-3細(xì)胞株中高表達(dá)，且Her-2癌基因蛋白與HSP70在細(xì)胞株中以復(fù)合物的形式存在。純化后獲得的蛋白復(fù)合物中包含相對分子質(zhì)

3、量分別為70KD和185KD的蛋白，且分別能與抗HSPT0和抗Her-2特異單抗結(jié)合，證實(shí)為HSP70和HER-2癌基因蛋白。結(jié)論：采用裂解液裂解、超聲破碎、高速離心、ConASepharose親和層析結(jié)合ADP agarose親和層析的方法可以從人乳腺癌SKBR-3細(xì)胞株中獲得相對純度較高的HSP70/Her-2癌基因蛋白復(fù)合物，該工作的完成為進(jìn)一步研究以HSP70/Her-2癌基因蛋白復(fù)合物為基礎(chǔ)的乳腺癌個體化免疫治療提供了依據(jù)。