熱休克蛋白60、70與斑禿關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景: 熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)又稱(chēng)應(yīng)激蛋白(stress protein，SP)，是一類(lèi)廣泛存在于自然界原核、真核細(xì)胞中且進(jìn)化高度保守的蛋白質(zhì)分子家族。在許多生物過(guò)程中起著重要作用，具有致病和保護(hù)、預(yù)防雙重性質(zhì)。在正常生理?xiàng)l件下，HSP呈基礎(chǔ)表達(dá)僅占細(xì)胞中蛋白總量的5％-10%，作為“分子伴侶”維持細(xì)胞的基本形態(tài)和功能；在應(yīng)激條件下，HSP表達(dá)明顯增加，參與細(xì)胞的損傷修復(fù)，維持細(xì)胞內(nèi)必需蛋白質(zhì)的空

2、間構(gòu)象，從而保護(hù)細(xì)胞的生命活動(dòng)。另外，HSP還參與抗原的加工遞呈、免疫球蛋白的裝配、T淋巴細(xì)胞的激活等。外界環(huán)境的刺激可引起機(jī)體產(chǎn)生HSP，這是對(duì)機(jī)體的一種保護(hù)機(jī)制，但這種保護(hù)機(jī)制有一定的限度。當(dāng)外界刺激長(zhǎng)期存在，使HSP長(zhǎng)期高度表達(dá)或外界刺激超過(guò)機(jī)體的耐受極限，HSP便有可能成為自身抗原，從而增加了自身免疫反應(yīng)的危險(xiǎn)性。此外，HSP還能通過(guò)細(xì)胞主動(dòng)分泌或壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放到體液中，激活外周免疫細(xì)胞表面Toll樣受體，刺激促炎因子的表達(dá)，

3、具有免疫調(diào)節(jié)作用。目前研究表明HSP參與了某些自身免疫性疾病的發(fā)生，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。對(duì)于HSP在自身免疫性皮膚病的發(fā)病過(guò)程中的所發(fā)揮的作用也受到越來(lái)越多的關(guān)注，已報(bào)道HSP與白癜風(fēng)、銀屑病、扁平苔蘚的發(fā)生密切相關(guān)。
　　斑禿（alopecia areata,AA）是一種非瘢痕性、炎癥性脫發(fā)性疾病，為皮膚科常見(jiàn)病和多發(fā)病。斑禿的發(fā)病機(jī)制尚不明確，研究發(fā)現(xiàn)脫發(fā)區(qū)毛囊及毛囊周?chē)l(fā)現(xiàn)有 CD4+和CD8+T

4、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、抗原提呈細(xì)胞數(shù)量增多、MHC-Ⅰ、Ⅱ類(lèi)分子表達(dá)增加，部分患者血液中針對(duì)毛囊特殊抗原的自身抗體滴度增高，毛囊周?chē)忻庖咔虻鞍缀兔庖邚?fù)合物沉積，循環(huán)血中輔助性T淋巴細(xì)胞和抑制性T淋巴細(xì)胞的比例異常，臨床上應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)或免疫抑制劑有效；這些均表明斑禿的發(fā)病與自身免疫功能的改變相關(guān)。故多數(shù)學(xué)者認(rèn)為斑禿是一種以毛囊為靶器官、T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病，在遺傳素質(zhì)和環(huán)境因素等多因素共同作用下發(fā)生。斑禿的發(fā)病誘因還涉及感染

5、、精神刺激等應(yīng)激事件，與HSP的產(chǎn)生有著共同的誘導(dǎo)因素。斑禿的發(fā)病是否與HSP的產(chǎn)生存在某種聯(lián)系? HSP是否在斑禿的應(yīng)激因素和自身免疫之間起到了橋梁作用？國(guó)外Wikramanyake等[22]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C3H/HeJ鼠皮損中HSP70的含量較對(duì)照組明顯升高，經(jīng)橡黃素治愈后的C3H/HeJ鼠皮損中HSP70含量大幅度降低，認(rèn)為HSP70在斑禿的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。國(guó)內(nèi)未見(jiàn)HSP70在斑禿中表達(dá)和作用的研究報(bào)道。而HSP60在

6、斑禿中的表達(dá)和作用的研究國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道。此外，國(guó)內(nèi)外也未見(jiàn)抗人HSP60/70抗體在斑禿發(fā)病機(jī)制中的研究報(bào)道。
　　目的: 通過(guò)檢測(cè)斑禿（alopecia areata,斑禿）患者頭皮組織中熱休克蛋白60及70（heat shock protein60/70,HSP60/70）的表達(dá)和斑禿患者血清中抗人HSP60/70抗體水平，初步探討HSP60/70及抗HSP60/70抗體在斑禿發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法: 應(yīng)用免疫組

7、織化學(xué)方法檢測(cè)28例斑禿患者頭皮組織中HSP60/70的表達(dá)與分布，與20例正常頭皮作對(duì)照；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)48例斑禿患者血清中的抗人HSP60/70抗體水平，與36例健康體檢者對(duì)照。
　　結(jié)果: （1）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示HSP60在斑禿皮損處毛囊細(xì)胞的著色程度均高于正常對(duì)照組，差異具有顯著性（P＜0.01）。正常組中毛囊周?chē)匆?jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，在斑禿組毛囊周?chē)梢?jiàn)蜂窩狀淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，HSP60在浸潤(rùn)的淋巴

8、細(xì)胞中呈弱陽(yáng)性表達(dá)。
　　HSP70在斑禿皮損處毛囊細(xì)胞的著色程度均高于正常對(duì)照組，差異具有顯著性（P＜0.01）。正常組中毛囊周?chē)匆?jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，在斑禿組毛囊周?chē)梢?jiàn)蜂窩狀淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，HSP70在浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)。
　?。?）斑禿組HSP60抗體水平為102.33±23.84ng/ml，正常組HSP60抗體水平為51.21±17.70 ng/ml，兩組間具有顯著性差異（P＜0.01）。
　　斑禿組HSP

9、70抗體水平96.92±18.99 ng/ml，正常組HSP70抗體水平為58.13±20.16ng/ml，兩組間具有顯著性差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論: (1)斑禿皮損處毛囊細(xì)胞中HSP60和HSP70過(guò)度表達(dá)，提示HSP60和HSP70在斑禿的發(fā)病中起一定的作用。
　　(2)斑禿患者血清中HSP60抗體和HSP70抗體水平顯著高于正常人群組，提示血清中抗人HSP60抗體和抗人HSP70抗體可能參與了斑禿的發(fā)病過(guò)程。<