人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達及純化.pdf_第1頁
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1、中國醫(yī)科大學博士學位論文人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達及純化姓名：李航宇申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：郭仁宣20050201中文結構式摘要人熱休克蛋白70基因在大腸桿菌中的融合表達及純化目的熱休克蛋白70(heatshockprotein70，HSPT0)做為肽的運載工具，參與人體內(nèi)諸多重要的生理功能。近年來，關于HSPT0與腫瘤免疫的研究成為熱點。目前，已有國外研究機構，應用HSPT0一肽復合物進行某些腫瘤的臨床

2、治療。但由于對HSPT0參與腫瘤免疫的機制了解有限，這種治療方法只限于個體化的腫瘤治療，不便臨床廣泛應用。因此，進一步闡明HSP70在機體腫瘤免疫過程中的作用及方式是突破這一“瓶頸”的關鍵，而獲得純化的HSPT0是進行這方面研究的基礎。本研究通過構建HSP70的原核表達載體，試圖體外獲得純化的HSP70蛋白。方法1擴增目的基因：用SDS裂解的方法從膽管癌組織中提取基因組DNA作為模板。根據(jù)Genebank中HSP70基因的核酸序列(M1

3、1717)設計一對引物，序列如下：5’端引物：5’一AAGAATTCATGGCCAAAGCCGCaZAGTCG一3’(劃線處為EcoRI酶切位點)；3’端引物：5’一ACCTCGAGCTAATC一7rACCTCCTCAATGGTG一3’(劃線處為XhoI酶切位點)，由寶生物工程(大連)有限公司合成。使用TaK冰aPlrrobestTMDNAPolymerasePCR擴增目的基因(10PyrobestBuffer5出、25mmol／LdN

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