28999.四種海藻熱休克蛋白70(hsp70)基因的克隆與表達(dá)分析

1、中國(guó)科學(xué)院海洋研究所博士學(xué)位論文四種海藻熱休克蛋白70（HSP70）基因的克隆與表達(dá)分析姓名：付萬(wàn)冬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：段德麟20090603付萬(wàn)冬四種海藻熱休克蛋白70(HSP70)基因的克隆與表達(dá)分析中科院海洋研究所博十學(xué)位論文海帶HSP70mRNA表達(dá)量呈先上升后下降趨勢(shì)。熱激1h后海帶HSP70mRNA表達(dá)量迅速上升，熱激7h后mRNA表達(dá)量達(dá)到最大，是對(duì)照組表達(dá)量的4倍。不同鹽度(O‰45‰)脅迫處理組

2、中，09／00或59／00鹽度處理組的海帶HSP70mRNA表達(dá)量是309／00鹽度處理組海帶HSP70mRNA表達(dá)量的3倍。35‰、40‰和459／00鹽度處理組之間HSP70mRNA表達(dá)量較低且無(wú)顯著差異。不同熱激溫度(540℃)處理組中，20℃或25℃處理的孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量較低，而5℃、35℃、或40℃處理組的孔石莼HSP70mRNA的表達(dá)量是25℃處理組孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量的2倍以上。30℃不同熱激時(shí)間(

3、012h)處理組中，孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量也呈先上升后下降趨勢(shì)。熱激5h后孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量達(dá)到最大，是對(duì)照組的35倍。不同鹽度(09／00459／00)脅迫處理組中，0％o或59／00鹽度處理組的孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量是309／00鹽度處理組孔石莼HSP70表達(dá)量的3倍。30‰、409／00和459／00鹽度處理組孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量較低，且無(wú)顯著差異。不同紫外線(xiàn)照射時(shí)間(O40h)和不同干燥時(shí)間

4、(040h)處理組中，孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量都在3h后達(dá)到最高值，之后表達(dá)量維持在較高水平。為進(jìn)一步研究藻類(lèi)HSP70的生物學(xué)功能，將海帶HSP70基因的開(kāi)放閱讀框區(qū)域克隆到表達(dá)載體pEASYE2中，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)pLysS。將陽(yáng)性重組子培養(yǎng)于含有√6岣(100U／，mL)的LB培養(yǎng)基，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDSPAGE電泳鑒定。經(jīng)5h誘導(dǎo)，其表達(dá)量達(dá)到平臺(tái)期，繼續(xù)培養(yǎng)HSP70表達(dá)量并不顯著增高。5mMIPT