異丙酚麻醉對小鼠腦內(nèi)GABA能神經(jīng)元激活作用的研究.pdf

1、全身麻醉的發(fā)展已有160多年的歷史，但全身麻醉的機(jī)理仍然不甚明了。尤其是全身麻醉的中樞機(jī)制，一直是麻醉學(xué)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。
　　近年來，異丙酚由于起效快、清除迅速和不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于臨床麻醉。但異丙酚作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的機(jī)制尚未完全闡明。離體和在體實(shí)驗(yàn)均表明異丙酚能增強(qiáng)GABA與GABAA受體的結(jié)合，增強(qiáng)抑制性突觸后電流，從而達(dá)到麻醉的效果。但就其對突觸前機(jī)制的研究甚少，異丙酚是否對GABA能神經(jīng)傳遞的突觸前神經(jīng)元

2、—GABA能神經(jīng)元也有一定的作用將是本實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)。
　　研究目的：觀察異丙酚麻醉過程中谷氨酸脫羧酶67-綠色熒光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠腦內(nèi)Fos蛋白及GABA能神經(jīng)元的活化情況，以了解突觸前神經(jīng)元在全麻機(jī)理中的可能作用，為闡明靜脈麻醉藥中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用靶位及機(jī)制提供資料。
　　研究方法：成年雄性GAD67-GFP基因敲入小鼠20只（第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部人體解剖學(xué)教研室提供）隨機(jī)分為2組：C組（CGroup）：

3、對照組，腹腔注射生理鹽水；T組（TGroup）：實(shí)驗(yàn)組，又分為三個(gè)亞組T1（5min），T2（30min），T3（1h）。采用腹腔注射異丙酚（130mg/kg）麻醉，分別在注射后5min，30min，1h進(jìn)行行為學(xué)評分，按照評分標(biāo)準(zhǔn)打分，評價(jià)其麻醉狀態(tài)。隨后立即處死并取腦，制取腦薄片（片厚30μm），分套收集，應(yīng)用免疫組織化學(xué)觀察神經(jīng)元活化標(biāo)記物Fos在全腦的表達(dá)分布情況。用上述制備待用的腦薄片，進(jìn)行GABA能神經(jīng)元與Fos的免疫熒光雙

4、標(biāo)染色。
　　研究結(jié)果：
　　1、行為學(xué)結(jié)果：在腹腔注射異丙酚后5min、30min和1h時(shí)行為學(xué)評分分別為5min時(shí)13分，30min時(shí)14分，1h時(shí)9分，表明5min和30min均能達(dá)到適度或深度麻醉效果，而1h時(shí)則處于過渡狀態(tài)。
　　2、對GAD67-GFP基因敲入小鼠腦內(nèi)Fos蛋白表達(dá)的觀察：與對照組相比，F(xiàn)os在海馬CA1、杏仁核(MeA)、丘腦室旁核(PV)、下丘腦室旁核(PaV)、齒狀回(DG)、下丘腦腹

5、內(nèi)側(cè)核(VMH)、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)(PaG)的表達(dá)在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)都有明顯增加(P<0.05)，在嗅球外叢狀層(EPI)有表達(dá)但與對照組相比無明顯差異(P>0.05)。
　　3、對GAD67-GFP基因敲入小鼠腦內(nèi)GABA和Fos蛋白共存表達(dá)的觀察：腹腔注射異丙酚后5min、30min和1h下丘腦腹內(nèi)側(cè)核有GABA與Fos共存，共存的細(xì)胞占該區(qū)域Fos陽性神經(jīng)元分別為：T1：80.3％，T2：89.7％，T3：91.6％，C：24.