魚藤酮對大鼠腦內(nèi)5-HT能神經(jīng)元影響的實驗研究.pdf

1、帕金森氏病(Parkinson’s disease，PD)是一種中老年人常見的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特點為選擇性的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元退行性變、腦內(nèi)多巴胺含量減少及胞體內(nèi)出現(xiàn)Lewy小體等。臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、運動遲緩和肌張力增高等運動障礙癥狀。 諸多研究證實PD的發(fā)病與遺傳因素和外界環(huán)境毒素的接觸有關(guān)；后者在PD發(fā)病過程中起著十分重要的作用。流行病學(xué)調(diào)查顯示，長期接觸某些殺蟲劑或除草劑等農(nóng)藥的人群PD發(fā)病率明顯高于其他人。

2、魚藤酮(Rotenone)是一種來源于某些植物根莖、近年被廣泛使用的一種天然殺蟲劑，其主要藥理作用是抑制細(xì)胞呼吸鏈對氧的利用，造成內(nèi)呼吸抑制性缺氧。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，多巴胺能神經(jīng)元對魚藤酮比較敏感。長期小劑量接觸魚藤酮的大鼠，可出現(xiàn)PD樣癥狀。病理檢查發(fā)現(xiàn)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元受損，表現(xiàn)為黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量的明顯減少、神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)PD特征性病理變化-Lewv小體以及黑質(zhì)投射靶區(qū)。紋狀體酪氨酸羥化酶(TH)的顯著降低。 近年研究發(fā)現(xiàn)

3、PD除運動障礙以外，還常伴有抑郁、焦慮、失眠和妄想等非運動障礙的精神癥狀。抑郁是其常見的精神癥狀之一，發(fā)生率高達(dá)70％，嚴(yán)重影響著PD患者的生活質(zhì)量。伴有抑郁的PD患者腦內(nèi)有5-羥色胺(5-HT)能神經(jīng)體系功能障礙。然而目前尚不清楚帕金森病所伴發(fā)的抑郁是在PD發(fā)病時即已有5-HT能神經(jīng)元受損、還是在PD治療過程中由于某些藥物的毒性作用改變了5-HT能神經(jīng)元體系的正常功能所致。 目的：本研究擬采用魚藤酮注射制備PD動物模型，觀察、

4、分析魚藤酮對大鼠腦內(nèi)5-HT能神經(jīng)體系的影響，探討其對5-HT能神經(jīng)元的毒性作用，為研究PD發(fā)病時伴有5-HT能神經(jīng)體系的受損提供直接的實驗依據(jù)。 方法：選用健康雄性Wistar大鼠和Lewis大鼠，隨機(jī)分為實驗組和對照組，實驗組背部皮下注射魚藤酮葵花油乳化液50天，3次/日；對照組注射葵花油50天。以免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測實驗組大鼠腦內(nèi)TH、色氨酸羥化酶(TPH)、5-HT以及5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(SERT)在腦內(nèi)的表達(dá)

5、改變。以HE染色、電鏡方法分別觀察魚藤酮對大鼠黑質(zhì)、中縫背核神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1．魚藤酮的毒性作用：3組實驗大鼠分別每日皮下注射魚藤酮2.5mg/kg、2.0mg/kg以及1.5mg/kg。2.5mg/kg和2.0mg/kg的兩組大鼠死亡率非常高；而1.5mg/kg組則死亡率較低，存活大鼠出現(xiàn)明顯的行為學(xué)改變，如行動減少、弓背屈曲、體重減輕等改變。 2．HE染色的結(jié)果：光鏡下可見實驗組黑質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)改變，出現(xiàn)皺

6、縮，部分神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜伊紅的Lewy小體。 3．免疫組織化學(xué)的實驗結(jié)果： (1)多巴胺(DA)能神經(jīng)元免疫組織化學(xué)結(jié)果：①正常大鼠中腦黑質(zhì)可見TH免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元分布呈“W狀”。②大鼠長期注射魚藤酮，對腦內(nèi)DA．能神經(jīng)元有不同程度的損傷，表現(xiàn)為TH免疫反應(yīng)強度在黑質(zhì)和紋狀體都有不同程度的降低；黑質(zhì)TH免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯少于對照組(P<0.01)。紋狀體的灰度值分析結(jié)果顯示，實驗組大鼠TH表達(dá)量明顯低于對照組，具有統(tǒng)

7、計學(xué)意義(P<0.01)。(2)5-羥色胺能神經(jīng)元免疫組織化學(xué)結(jié)果：①正常大鼠腦干5-HT能神經(jīng)元主要集中在中腦下丘階段。低倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，中縫背核在橫切面整體形態(tài)呈噴泉狀。高倍鏡下5-HT免疫組織化學(xué)染色顯示細(xì)胞呈棕褐色，胞體大小均一，多呈橢圓形，胞漿內(nèi)染色顆粒均一，胞核可見。TPH免疫組織化學(xué)染色觀察與5-HT顯示結(jié)果相一致。②魚藤酮背部皮下注射對大鼠腦內(nèi)5-HT能神經(jīng)元有不同程度的損傷，表現(xiàn)中腦中縫背核5-HT、TPH免疫反應(yīng)陽性

8、神經(jīng)元數(shù)目比對照組明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；紋狀體5-HT、SERT免疫反應(yīng)強度靜態(tài)灰度值分析實驗組比對照組免疫反應(yīng)強度降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 4.流式細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果：流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測中腦TH、5-HT、TPH王三個指標(biāo)的表達(dá)，實驗組和對照組相比都有不同程度的降低。TH、TPH和5-HT的表達(dá)量分別降低了28.5％、38.34％和47.93％。盡管統(tǒng)計學(xué)分析沒有明顯的差異(P>0.05)，但均普遍