中國人種深靜脈血栓形成及腦梗死患者抗凝血酶劍橋Ⅱ基因突變發(fā)生頻率及與靜脈血栓形成相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：血栓性疾病尤其是心、腦血管血栓性疾病，已成為我國人口病死原因的第一位，且發(fā)病率有增加趨勢，嚴(yán)重危害人類健康。深靜脈血栓形成(Deep Venous Thrombosis)是較常見的四肢血管血栓栓塞性疾病。近年來，本病的發(fā)病率呈逐年增加趨勢。據(jù)報道，美國每年有25萬-50萬人患靜脈血栓栓塞性疾病。我國靜脈血栓形成發(fā)生率也呈逐年增多趨勢，已位居繼缺血性心臟病、腦卒中后的第三位。據(jù)VITAE研究結(jié)果報告，歐盟致命和非致命性癥狀性靜脈

2、血栓栓塞患者(VTE)每年已超過150萬例，其中54.35萬病例死亡。在歐洲，因靜脈血栓栓塞死亡的患者人數(shù)超過死于乳腺癌、前列腺癌、艾滋病、交通意外人數(shù)的總合。靜脈血栓栓塞常常是一種無癥狀性疾病，它的第一次表現(xiàn)可能是致命的，因此，深入研究靜脈血栓栓塞的病因和發(fā)病機(jī)制，針對血栓形成的高危因素進(jìn)行及時干預(yù)，對于降低深靜脈血栓形成的發(fā)生率和死亡率具有重要的意義。 深靜脈血栓形成(DVT)是一種單基因或多基因遺傳性疾病。多種抗凝血或促凝

3、蛋白基因突變與DVT發(fā)病相關(guān)。其中，抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)基因突變與DVT發(fā)生率關(guān)系更為密切[1]。新近，英國Correl等報道抗凝血酶劍橋Ⅱ(A384S)突變是DVT發(fā)病的主要遺傳危險因子，同時也是在白種人中引起抗凝血酶缺陷癥最主要的原因[2]。 為了解抗凝血酶劍橋Ⅱ(A384S)突變在不同人種中的分布頻率，本課題以60例正常人，50例DVT，60例腦梗死患者為研究對象，使用PCR及限制性內(nèi)切酶酶切方法測定該基因的突變位點(diǎn)，并

4、對AT-Ⅲ活性變化在DVT和腦梗死患者的分布狀態(tài)進(jìn)行了觀察，為獲得抗凝血酶劍橋Ⅱ突變在國人血栓性疾病中的分布頻率及DVT的高危因素篩查提供依據(jù)。 第一部分血栓形成患者抗凝血酶劍橋Ⅱ A384S基因突變點(diǎn)鑒定。 目的：獲得中國人種深靜脈血栓形成患者及腦梗死患者抗凝血酶劍橋Ⅱ(A384S)突變的百分率，并分析其與血栓形成的相關(guān)性。 方法：50例深靜脈血栓患者，60例腦梗死患者及正常對照60例均常規(guī)抽取靜脈血4.5ml

5、，以3.8％枸櫞酸鈉1:9體積抗凝。用酚氯仿法抽提基因組DNA，并用前向引物5'-TGAGGAATTGCTGTGTCTGTG-3'和反向引物5'-AGAGGTGCAAAGAATAAGAA-3'進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段含AT-劍橋ⅡA384S核苷酸位點(diǎn)，擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物通過限制性內(nèi)切酶PvuⅡ進(jìn)行酶切消化，以確定是否存在AT-劍橋ⅡA384S突變。 結(jié)果：60例正常對照，50例DVT患者和60例腦梗死患者中均未發(fā)現(xiàn)抗凝血酶劍橋Ⅱ

6、A384S基因突變。 結(jié)論：在中國人種的深靜脈血栓形成及腦梗死患者，抗凝血酶劍橋ⅡA384S突變可能并非血栓形成的高危因素。 第二部分抗凝血酶活性在深靜脈血栓形成患者及腦梗死患者中的變化及意義。 目的：檢測深靜脈血栓形成患者及腦梗死患者血漿AT-Ⅲ活性水平，篩選與深靜脈血栓形成相關(guān)的危險因素方法：分離60例正常人，50例DVT患者及60例腦梗死患者外周血血漿，通過發(fā)色底物法測定血漿抗凝血酶Ⅲ的活性。 結(jié)果