幽門螺桿菌aphA及ahpC基因在克拉霉素藥物壓力下的表達(dá)研究.pdf

1、目的：培養(yǎng)幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，分析在克拉霉素藥物壓力下幽門螺桿菌基因的表達(dá)情況；進(jìn)而研究幽門螺桿菌在藥物選擇壓力作用下菌體的生長情況，分析aphA及ahpC基因的表達(dá)，探索aphA及ahpC基因在幽門螺桿菌克拉霉素藥物選擇壓力過程中的表達(dá)變化。 方法：將幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC 26695，接種于含7％-10％綿羊血的幽門螺桿菌培養(yǎng)基，37℃微需氧環(huán)境培養(yǎng)3-5天，將幽門螺桿菌分成克拉霉素誘導(dǎo)壓力組和克拉霉素非誘導(dǎo)壓力組，每組

2、培養(yǎng)10天。克拉霉素藥敏試驗(yàn)采用E-Test法，藥物濃度梯度為小于0.016μ/mL，用該濃度藥物誘導(dǎo)幽門螺桿菌10天，提取幽門螺桿菌菌體RNA，反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增幽門螺桿菌cDNA，選取幽門螺桿菌aphA及ahpC基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以幽門螺桿菌gyr基因作為對照內(nèi)參基因，通過瓊脂糖凝膠電泳分析aphA及ahpC兩個(gè)基因的表達(dá)變化。 結(jié)果：選取克拉霉素濃度為小于0.016μ/mL進(jìn)行誘導(dǎo)幽門螺桿菌菌體。aphA及ahp

3、C基因的PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳，并與gyr基因進(jìn)行比較，用Bio-rad軟件進(jìn)行PCR產(chǎn)物亮度分析。結(jié)果表明培養(yǎng)5-10天后，用藥組和非用藥組的aphA基因與gyr基因的亮度比值分別為：0.63、0.68、1.16、0.70、1.16、1.03、1.20、1.04、1.54、1.41、0.45、0.77、0.74、0.75、0.77、0.64、0.70、1.02、0.85、0.73。ahpC基因與gyr基因的亮度比值分別為：1.6

4、7、1.32、1.35、1.56、1.23、1.14、1.52、1.46、1.25、1.17、1.22、1.27、1.39、1.22、1.46。aphA基因用藥組與非用藥組的比值分別為：1.4、0.88、1.56、0.93、1.50、1.60、1.71、1.01、1.81、1.93：ahpC基因用藥組與非用藥組的比值分別為：1.36、1.03、0.97、1 32、 1.15、 0.87。 結(jié)論：通過克拉霉素誘導(dǎo)幽門螺桿菌培養(yǎng)會引