幽門螺桿菌鞭毛基因的克隆和表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、作者采用基因克隆技術,將來自一臨床分離Hp MEL-HP27的fla(flaA1533bp、flab1545 bp)基因全長進行PCR擴增,并與克隆載體pNEb193進行連接,制備重組質粒,然后導入大腸桿菌TB1中,用藍白實驗初步篩選可疑陽性克隆.可疑陽性克隆進一步進行特異PCR和酶切鑒定后對插入片斷進行測序,并將測定的序列與已知序列進行同源性比較.由于flaA編碼主要的鞭毛蛋白,所以將測序鑒定后的flaA基因插入表達載體pMAL -C

2、2x,所得的重組表達載體轉化大腸桿菌TB1,篩選陽性克隆經(jīng)PCR、酶切鑒定后,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導其編碼的蛋白表達,用SDS-PAGE、Western-blot的方法鑒定表達產(chǎn)物及其免疫反應性.1.首次將Hp河南分離株MEL-HP27的flaA基因、flaB基因成功地克隆并測序.2.測序結果從基因水平上證明了flaA基因、flaB基因確實是一個比較保守的基因,支持了鞭毛基因可以作為Hp疫苗的候選成分之一.3.首

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