球型脂聯(lián)素對高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO和DDAH-ADMA系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的：探討球型脂聯(lián)素（gad）對高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）NO及DDAH-ADMA系統(tǒng)的影響
　　方法：體外培養(yǎng)HUVECs至對數(shù)生長期，gad(2.5ug/ml)處理高糖誘導(dǎo)不同時(shí)間（24h、48h）HUVECs，不同濃度 gad（0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml）處理高糖誘導(dǎo)48h HUVECs，硝酸還原酶法測定培養(yǎng)液上清NO濃度；再將HUVECs隨機(jī)分為正常對照組（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖組

2、（33.0mmol/L）、gad組（33.0mmol/L葡萄糖+2.5ug/ml gad），L-NAME組（33.0mmol/L葡萄糖+2.5μg/ml gad+100μmol/L L-NAME），硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液上清NO濃度，化學(xué)比色法測定NOS活力，高效液相色譜法分析ADMA水平，根據(jù)ADMA的量反映DDAH活性，western blot檢測eNOS、P-eNOS的表達(dá)。
　　結(jié)果：①gad處理高糖誘導(dǎo)HUVECs不同時(shí)

3、間（24h、48h），高糖作用24h，引起NO分泌增加，而作用48h，NO分泌顯著減少（P<0.05），與同一時(shí)間高糖組相比，gad組NO顯著升高（P<0.05）；②不同濃度gad（0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml）處理高糖誘導(dǎo)48h HUVECs，NO水平先隨gad濃度的增加而顯著增加，但gad2.5μg/mL與12.5μg/mL相比，NO水平差異無顯著性（P<0.05）；③2.5μg/ml gad處理高糖誘導(dǎo)48h HUV

4、ECs，高糖組較對照組相比，NO含量顯著降低，NOS活性及p-eNOS表達(dá)均減少（P<0.05），而總eNOS表達(dá)無顯著差異（P>0.05）；④高糖組與正常對照組相比ADMA含量升高，DDAH活性降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），2.5μg/mL gad處理后，與高糖組相比，NO含量顯著升高，NOS活性顯著增強(qiáng)，P-eNOS表達(dá)顯著增加，總eNOS蛋白表達(dá)仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；ADMA水平gad組與高糖組相比降低，DD

5、AH活性增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），加入 L-NAME100μmol/L，與gad組相比，NO含量顯著減少，NOS活性減低，P-eNOS表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），總eNOS表達(dá)仍無差異（P>0.05），ADMA水平升高，DDAH活性降低，差異均具有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴高糖環(huán)境下gad可逆轉(zhuǎn)HUVECs合成NO的減少，并升高NOS活性，增加eNOS-Ser1177磷酸化，但對eNOS