DDAH-ADMA系統(tǒng)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞組織因子表達作用及其機制研究.pdf

1、中南大學博士學位論文DDAHADMA系統(tǒng)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞組織因子表達作用及其機制研究姓名：信紅亞申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（血液病學）指導教師：陳方平20070501ATRA及DMB分別在抑制白血病細胞或LPS誘導內(nèi)皮細胞表達TF中的作用以及該作用是否與調(diào)節(jié)DDAWADMA通路有關(guān)進行了探討?；谏鲜鲈O想，本研究對以下二個方面進行了探討：(1)檢測舢)MA水平與血漿11P在急性白血病患者中的表達，并在白血病細胞與內(nèi)皮細胞細胞共培養(yǎng)模型中

2、探討DDAH偽m嗄A通路對白血病細胞誘導內(nèi)皮細胞表達TF的調(diào)節(jié)作用及其機制；(2)研究DDAH，ADMA通路在LPS誘導內(nèi)皮細胞表達TF的作用，及其在口山酮抑制LPS誘導內(nèi)皮細胞表達TF中的作用。方法(1)選擇121例急性白血病患者，健康對照組20例。(2)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(H【ⅣECs)和急性粒細胞白血病細胞株(HL60)。建立白血病細胞與內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)模型。(3)構(gòu)建址^D!f4H2cⅨ叮A表達質(zhì)粒，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HIⅣECs獲

3、得過表達DD√址12的內(nèi)皮細胞。(4)高效液相色譜法(m，LC)測定血漿及細胞培養(yǎng)上清液中剮弧壓A的含量；通過測定被酶代謝掉的舢孫譙的量評價內(nèi)皮細胞DDJAH的活性。(5)酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)定量檢測血漿TF抗原含量。(6)Mrr法觀察細胞活力。(7)一期凝固法檢測培養(yǎng)細胞凍融液的促凝活性。(8)肝PCR法檢測TF及DDAH2m鼢認水平。(9)WestemB10t檢測D1)AH2蛋白表達。(10)熒光ca2示蹤劑Fum

4、2檢測細胞內(nèi)ca2濃度(【ca飛)。(11)熒光發(fā)光法檢測細胞內(nèi)氧自由基(RoS)生成。(12)凝膠電泳遷移率法(EMSA)分析核因子一1cB(NF柚)的ⅨqA結(jié)合活性。結(jié)果(1)初治急性白血病患者血漿舢孫執(zhí)水平及TF抗原表達明顯高于健康對照組(P001)；化療后血漿A】)MA水平顯著降低(PO01)；未緩解組和完全緩解組血漿舢孫tA水平明顯低于初治組(P001)。復發(fā)組與初治組血漿舢)MA水平無顯著差異(PO01)；初治急性白血病患者

5、血漿知)~認水平與血漿TF抗原表達呈正相關(guān)但=o853，PO01)。(2)HL60與mⅣECs共培養(yǎng)后，混合細胞TF促凝活性顯著增高，且增加的促凝活性來自于內(nèi)皮細胞而非HL60。外源性舢)MA(1M)預處理H【ⅣECs細胞后可顯著增強共培養(yǎng)所致TF活性及nl】瞼IA表達上調(diào)的作用；相反，過表達DDAH2可顯著抑制此過程。(3)共培養(yǎng)上清可顯著增加細胞內(nèi)Ca2濃度(【Ca2氣)，此過程可被預處理柚)MA(1M)增強，被過表達D】)_此明顯