4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用及其可能機(jī)制.pdf

1、全反式維甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)作為誘導(dǎo)分化劑的代表,已廣泛應(yīng)用于急性早幼粒性細(xì)胞白血病的臨床治療,其能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向正?；蚪咏＜?xì)胞方向分化,從而達(dá)到治愈腫瘤的目的,但同時(shí)也存在維甲酸綜合征和耐藥等不足。本實(shí)驗(yàn)室以 ATRA為先導(dǎo)化合物,通過對(duì)其碳鏈末端極性基團(tuán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,合成了一系列全新的維甲酸衍生物,經(jīng)過體外藥效學(xué)篩選發(fā)現(xiàn)4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifl

2、uoromethyl-phenyl retinate,ATPR)具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)分化活性,有望開發(fā)成為一種新型的誘導(dǎo)分化劑。本研究以鼠淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞株YAC-1和人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Jeko-1為研究對(duì)象,通過體外實(shí)驗(yàn)觀察ATPR對(duì)淋巴瘤細(xì)胞分化的作用,并探討其作用的可能機(jī)制。
　　目的:觀察新型維甲酸衍生物 ATPR對(duì)淋巴瘤細(xì)胞分化的影響,并探討其作用的可能機(jī)制。
　　內(nèi)容:
　　1.觀察ATPR對(duì)YAC-1和Jek

3、o-1細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用。
　　2.觀察ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞中維甲酸受體表達(dá)的影響。
　　3.探討PTEN/PI3K/Akt通路在ATPR誘導(dǎo)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞分化過程中的作用。
　　方法:
　　1.ATPR誘導(dǎo)分化作用的觀察:MTT法觀察ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞增殖的影響;倒置顯微鏡下觀察ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞形態(tài)的影響;NBT還原試驗(yàn)法分析YAC-1和

4、Jeko-1細(xì)胞的功能分化程度;同時(shí),以Jeko-1細(xì)胞為研究對(duì)象,采用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期的變化及特異性分化指標(biāo)CD38的表達(dá)變化。
　　2.維甲酸受體的檢測(cè):RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞維甲酸受體mRNA表達(dá)和蛋白水平的影響。
　　3.PTEN/PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白的檢測(cè):采用Western Blot法檢測(cè)ATPR引起的YAC-1細(xì)胞中PTEN/PI3K/A

5、kt和cyclinD蛋白水平的變化。采用RNA干擾技術(shù)靶向技術(shù)沉默Jeko-1細(xì)胞PTEN基因,6h后加入ATPR及ATRA作用72h后采用Western Blot法觀察pAkt和cyclinD蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1.ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞有誘導(dǎo)分化作用:MTT結(jié)果顯示,ATPR能抑制YAC-1和Jeko-1細(xì)胞增殖;顯微鏡下觀察,ATPR可誘導(dǎo)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞形態(tài)呈分化改變;NBT

6、陽性細(xì)胞百分比顯著升高;在 Jeko-1細(xì)胞中,G0/G1期細(xì)胞比例上升,表面分化抗原CD38表達(dá)顯著增加。
　　2.ATPR通過和維甲酸受體結(jié)合發(fā)揮誘導(dǎo)分化的作用:ATPR引起YAC-1細(xì)胞中RARα的mRNA表達(dá)和蛋白水平升高,RARβ和RARγ mRNA表達(dá)和蛋白水平無明顯變化;ATPR引起Jeko-1細(xì)胞中RARα和RARγ的mRNA表達(dá)和蛋白水平升高,而RARβmRNA表達(dá)和蛋白水平無明顯變化。
　　3.ATPR通

7、過調(diào)節(jié)PTEN/PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白發(fā)揮誘導(dǎo)分化的作用:ATPR在YAC-1細(xì)胞中可誘導(dǎo)PTEN蛋白表達(dá)升高,并下調(diào)p-Akt和cyclinD的蛋白表達(dá);在Jeko-1細(xì)胞中,靶向沉默PTEN基因6h后加入ATPR及ATRA作用72 h發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染后加藥組p-Akt和cyclinD蛋白表達(dá)量明顯增高。
　　結(jié)論:
　　1.ATPR對(duì)YAC-1和Jeko-1細(xì)胞具有誘導(dǎo)分化作用。
　　2.ATPR在YAC-