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文檔簡介
1、本文探討了維甲酸(RA)誘導(dǎo)小鼠成神經(jīng)瘤細(xì)胞N2a的分化,并研究microRNA(miRNA)對RA誘導(dǎo)神經(jīng)元分化中的作用。首先,我們驗證了N2a是否能在維甲酸(RA)的誘導(dǎo)下分化為神經(jīng)元。結(jié)果表明,經(jīng)過5天的RA誘導(dǎo),N2a細(xì)胞的神經(jīng)突起延伸,胞體面積增大,有明顯的分化誘導(dǎo)作用,分化的N2a細(xì)胞占總細(xì)胞的數(shù)量約為40%。進(jìn)一步的實驗表明,成熟神經(jīng)元標(biāo)記蛋白MAP2的表達(dá)量明顯增加,證實了經(jīng)RA處理后,N2a細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化。
2、> 大量實驗表明,miRNA在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)元分化過程中起重要作用,但miRNA在RA誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞分化過程中的作用尚未見報道。本文系統(tǒng)檢測了RA誘導(dǎo)N2a細(xì)胞后miRNA的表達(dá)變化,其中包括了miR-124、miR-125b、miR-9和let-7a。實驗結(jié)果表明,N2a細(xì)胞經(jīng)過RA處理后,miR-124、miR-9表達(dá)量明顯上升,而miR-125b的表達(dá)量下降,let-7a的表達(dá)沒有發(fā)生顯著改變。
我們檢測
3、了三種miRNA在N2a細(xì)胞分化中的作用,首先,在N2a細(xì)胞中過量表達(dá)或抑制miR-124,然后通過觀察細(xì)胞的形態(tài)變化檢測其對神經(jīng)細(xì)胞分化的作用。實驗結(jié)果表明,過量表達(dá)miR-124能有效誘導(dǎo)N2a細(xì)胞神經(jīng)突起的生長,而抑制過表達(dá)的miR-124則幾乎完全阻斷了這種形態(tài)變化。免疫組化分析表明,過量表達(dá)miR-124后,MAP2蛋白的表達(dá)量明顯增加,進(jìn)一步證實了,miR-124過量表達(dá)誘導(dǎo)了N2a細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化。過量表達(dá)miR-12
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