NF-κB信號通路對波動性高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：以核因子κB(NF-κB)p65基因特異的RNA干擾(RNAi)腺病毒表達載體作為研究工具，初步探討NF-κB信號通路對波動性高糖(含5.5或30.5 mM D-葡萄糖培養(yǎng)液，每日交替)下人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cell，HUVEC)增殖的影響，同時檢測細胞凋亡相關(guān)分子bcl-2表達情況。
　　 方法：利用體外同源重組技術(shù)構(gòu)建NF-κB p65基因特異的siRNA腺

2、病毒表達載體，在HEK293A細胞中包裝并擴增病毒、空斑實驗法測定病毒滴度；p65特異的siRNA腺病毒感染HUVEC，同時予波動性高糖干預(yù)，Western印記法測定p65蛋白表達和NF-κB核轉(zhuǎn)錄的影響；以AlamarBlue法檢測細胞增殖；Western印記法檢測bcl-2表達。
　　 結(jié)果：1.成功構(gòu)建了針對NF-κBp65特異的RNAi腺病毒表達載體；2.NF-κBp65特異的RNAi腺病毒感染HUVEC后可使p65表達

3、量明顯下降；3.波動性高糖下，RNAi腺病毒感染HUVEC后，亦可檢測到p65表達量下降，且隨時間延長p65表達量進一步減少，抑制效應(yīng)至少持續(xù)至干預(yù)后第七天；4.NF-κBp65特異腺病毒感染HUVEC，可以明顯抑制波動性高糖刺激的NF-κBp65核蛋白轉(zhuǎn)錄，使核內(nèi)p65蛋白表達處于基礎(chǔ)水平；5.AlamarBlue結(jié)果分析，NF-κBp65特異腺病毒感染HUVEC可以使波動性高糖誘導(dǎo)的細胞增殖抑制下降(P＜0.01)，但比正常葡萄糖濃