GLP-1(7-36)對高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的:研究GLP-1(7-36)對高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)凋亡的影響及作用機(jī)制。
　　 方法:正常糖(5mmol/1)和高糖(33mmol/1)環(huán)境下培養(yǎng)的HUVECs分別加入不同濃度的GLP-1(7-36)(0nmol/l,0.3nmol/l,3nmol/l,30nmol/l)并干預(yù)不同時間(24h,48h,72h),然后行MTT檢測細(xì)胞活力以初步確定GLP-1(7-36)合適的干預(yù)時間及濃度點(diǎn)。實(shí)驗分組如下

2、:①正常糖濃度對照組(NG)、②高糖濃度損傷組(HG)、④高糖濃度下加入3nmol/l GLP-1組(HG+GLP-1)、④正常糖濃度下加入3nmol/l GLP-1組(NG+GLP-1)、⑤加PI3K抑制劑的高糖并GLP-1組(HG+GLP-1+Wortmannin)、⑥加eNOS抑制劑的高糖并GLP-1組(HG+GLP-1+L-NAME)。各實(shí)驗組分別采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞早期凋亡率、western blot檢測p-Akt和p-eN

3、OS蛋白含量、一氧化氮檢測試劑盒檢測NO的濃度。
　　 結(jié)果:(1)HUVECs經(jīng)高糖培養(yǎng)48h、72h后MTT檢測細(xì)胞活力下降(p＜0.05),經(jīng)3nmol/l、30nmol/l GLP-1(7-36)干預(yù)48h、72h后活力明顯增加(p＜0.01),而干預(yù)相同時間點(diǎn)的不同濃度組之間無明顯差異(p＞0.05);(2)HG組與NG組相比,細(xì)胞早期凋亡率顯著增加(p＜0.01),p-Akt、p-eNOS蛋白表達(dá)下降(p＜0.05)

4、,NO的產(chǎn)量下降(p＜0.05);(3)HG+GLP-1組與HG組相比,細(xì)胞早期凋亡率下降(p＜0.05),p-Akt、p-eNOS蛋白表達(dá)上調(diào)(p＜0.05),NO的產(chǎn)量上升(p＜0.05);(4)HG+GLP-1+Wortmannin與HG+GLP-1相比,細(xì)胞早期凋亡率增加(p＜0.05),p-Akt、p-eNOS蛋白的表達(dá)下調(diào)(p＜0.05),NO水平下降(p＜0.05);(5)HG+GLP-1+L-NAME與HG+GLP-1相